BspQI
BspQI पुन्हा संयोजीतपणे E. coli मध्ये व्यक्त केले जाऊ शकते जे विशिष्ट साइट ओळखू शकते आणि अंतर्गत तयार केले जाते.
BspQI, एक IIs प्रतिबंध एंडोन्यूक्लिझ प्रतिबंध एंडोन्यूक्लिझ, रिकॉम्बिनंट ई. कोलाई स्ट्रेनपासून प्राप्त झाला आहे जो बॅसिलस स्फेरिकसपासून क्लोन केलेला आणि सुधारित BspQI जनन घेऊन जातो.हे विशिष्ट साइट ओळखू शकते आणि ओळख अनुक्रम आणि क्लीव्हेज साइट्स खालीलप्रमाणे आहेत:
5' · · · · GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · · · 3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
उत्पादन वैशिष्ट्ये
1. उच्च क्रियाकलाप, जलद पचन;
2. कमी तारा क्रियाकलाप, "स्कॅल्पेल" सारखे अचूक कटिंग सुनिश्चित करणे;
3. BSA शिवाय आणि प्राणी-मूळ मुक्त;
मेथिलेशन संवेदनशीलता
Dमी मेथिलेशन:संवेदनशील नाही;
Dसेमी मेथिलेशन:संवेदनशील नाही;
CpG मेथिलेशन:संवेदनशील नाही;
स्टोरेज परिस्थिती
उत्पादन पाठवले जावे ≤ 0℃;-25~- 15℃ स्थितीत साठवा.
स्टोरेज बफर
20mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA, 500 mM KCl, 1.0 mM dithiothreitol, 500 µg/ml रीकॉम्बिनंट अल्ब्युमिन, 0. 1% ट्रिशन X- 100 आणि 50% ग्लिसरॉल (pH 7.0 @ 25°C).
युनिट व्याख्या
50 μL च्या एकूण प्रतिक्रिया व्हॉल्यूममध्ये 50°C वर 1 तासात 1µg अंतर्गत नियंत्रण DNA पचवण्यासाठी आवश्यक एंजाइमची मात्रा म्हणून एक युनिट परिभाषित केले जाते.
गुणवत्ता नियंत्रण
प्रथिने शुद्धता परख (SDS-PAGE):BspQI ची शुद्धता ≥95% SDS-PAGE विश्लेषणाद्वारे निर्धारित केली गेली.
RNase:1.6μg MS2 RNA सह BspQI चे 10U 50℃ वर 4 तासांसाठी ॲग्रोज जेल इलेक्ट्रोफोरेसीस द्वारे निर्धारित केल्याप्रमाणे कोणतेही ऱ्हास उत्पन्न करत नाही.
नॉन-विशिष्ट DNase क्रियाकलाप:BspQI चे 10U 1μg λ DNA सह 16 तासांसाठी 50℃ वर, 1 तासासाठी 50℃ च्या तुलनेत, agarose जेल इलेक्ट्रोफोरेसीसने निर्धारित केल्यानुसार जास्त DNA मिळत नाही.
बंधन आणि पुनरावृत्ती:10U BspQI सह 1 μg λDNA चे पचन झाल्यानंतर, DNA तुकडे T4 DNA ligase सह 16ºC वर बांधले जाऊ शकतात.आणि हे बांधलेले तुकडे BspQI सह पुन्हा कापले जाऊ शकतात.
ई कोलाय् DNA: E. coli 16s rDNA-विशिष्ट TaqMan qPCR शोधने दाखवले की E.coli जीनोम अवशेष ≤ 0.1pg/ul.
यजमान प्रथिने अवशेष:≤ 50 पीपीएम
जिवाणू एंडोटॉक्सिन: LAL-चाचणी, चीनी फार्माकोपिया IV 2020 आवृत्तीनुसार, जेल मर्यादा चाचणी पद्धत, सामान्य नियम (1143).बॅक्टेरियल एंडोटॉक्सिन सामग्री ≤10 EU/mg असावी.
प्रतिक्रिया प्रणाली आणि परिस्थिती
| घटक | खंड |
| BspQ I(10 U/μL) | 1 μL |
| डीएनए | 1 μg |
| 10 x BspQ I बफर | 5 μL |
| dd H2O | 50 μL पर्यंत |
प्रतिक्रिया परिस्थिती: 50℃, 1~ 16 ता.
उष्णता निष्क्रियता: 20 मिनिटांसाठी 80°C.
शिफारस केलेली प्रतिक्रिया प्रणाली आणि परिस्थिती तुलनेने चांगला एन्झाइम पचन प्रभाव प्रदान करू शकतात, जे फक्त संदर्भासाठी आहे, कृपया तपशीलांसाठी प्रायोगिक परिणाम पहा.
उत्पादन अर्ज
निर्बंध एंडोन्यूक्लीज पचन, जलद क्लोनिंग.
नोट्स
1. एंझाइमची मात्रा ≤ प्रतिक्रियेच्या व्हॉल्यूमच्या 1/10.
2. ग्लिसरॉल एकाग्रता 5% पेक्षा जास्त असेल तेव्हा तारा क्रियाकलाप होऊ शकतो.
3. शिफारशीत प्रमाणापेक्षा कमी सब्सट्रेट असताना क्लीव्हेज क्रियाकलाप होऊ शकतो.
