DNase I
DNase I (Deoxyribonuclease I) एक एंडोडिओक्सायरिबोन्यूक्लीज आहे जो एकल- किंवा दुहेरी-असरलेल्या DNA पचवू शकतो.हे 5′-टर्मिनलवर फॉस्फेट गटांसह monodeoxynucleotides किंवा सिंगल- किंवा डबल-स्ट्रँडेड oligodeoxynucleotides आणि 3′-टर्मिनलवर हायड्रॉक्सिल तयार करण्यासाठी फॉस्फोडीस्टर बंध ओळखते आणि तोडते.DNase I ची क्रिया Ca2+ वर अवलंबून असते आणि Mn2+ आणि Zn2+ सारख्या द्विसंयोजक धातू आयनद्वारे सक्रिय केली जाऊ शकते.5mM Ca2+ एंझाइमचे हायड्रोलिसिसपासून संरक्षण करते.Mg2+ च्या उपस्थितीत, एंझाइम यादृच्छिकपणे DNA च्या कोणत्याही स्ट्रँडवरील कोणतीही साइट ओळखू शकतो आणि क्लीव्ह करू शकतो.Mn2+ च्या उपस्थितीत, DNA चे दुहेरी पट्टे एकाच वेळी ओळखले जाऊ शकतात आणि जवळजवळ एकाच ठिकाणी क्लीव्ह केले जाऊ शकतात जेणेकरून 1-2 न्यूक्लियोटाइड्स पसरलेल्या सपाट टोकाचे DNA तुकडे किंवा चिकट टोकाचे DNA तुकडे तयार होतात.
उत्पादन मालमत्ता
बोवाइन स्वादुपिंड DNase I यीस्ट अभिव्यक्ती प्रणालीमध्ये व्यक्त केले गेले आणि शुद्ध केले गेले.
Cघटक
| घटक | खंड | |||
| 0.1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I, RNase-मुक्त | 20μL | 200μL | 1 मिली | 10 मिली |
| 10×DNase I बफर | 1 मिली | 1 मिली | 5×1mL | 5 × 10 मिली |
वाहतूक आणि स्टोरेज
1. स्टोरेज स्थिरता: – स्टोरेजसाठी 15℃~-25℃;
2. वाहतूक स्थिरता: बर्फ पॅक अंतर्गत वाहतूक;
3. यामध्ये पुरवले: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% ग्लिसरॉल, 25℃ वर pH 7.6.
युनिट व्याख्या
एका युनिटची व्याख्या एंझाइमची मात्रा म्हणून केली जाते जी 1 µg pBR322 DNA 10 मिनिटांत 37°C वर पूर्णपणे खराब करेल.
गुणवत्ता नियंत्रण
RNase:1.6 μg MS2 RNA सह DNase I चे 5U 37 ℃ वर 4 तासांसाठी ॲग्रोज जेल इलेक्ट्रोफोरेसीसने निर्धारित केल्याप्रमाणे कोणतेही ऱ्हास उत्पन्न करत नाही.
जिवाणू एंडोटॉक्सिन:LAL-चाचणी, चीनी फार्माकोपिया IV 2020 आवृत्तीनुसार, जेल मर्यादा चाचणी पद्धत, सामान्य नियम (1143).बॅक्टेरियल एंडोटॉक्सिन सामग्री ≤10 EU/mg असावी.
वापरासाठी सूचना
1. खाली सूचीबद्ध केलेल्या प्रमाणानुसार RNase-मुक्त ट्यूबमध्ये प्रतिक्रिया समाधान तयार करा:
| घटक | खंड |
| आरएनए | X μg |
| 10 × DNase I बफर | 1 μL |
| DNase I, RNase-मुक्त (5U/μL) | 1 U प्रति μg RNA |
| ddH2O | 10 μL पर्यंत |
15 मिनिटांसाठी 2.37 ℃;
3. प्रतिक्रिया थांबवण्यासाठी टर्मिनेशन बफर जोडा, आणि DNase I निष्क्रिय करण्यासाठी 10 मिनिटांसाठी 65℃ वर गरम करा. नमुना पुढील ट्रान्सक्रिप्शन प्रयोगासाठी थेट वापरला जाऊ शकतो.
नोट्स
1. प्रति μg RNA साठी 1U DNase I वापरा, किंवा 1μg RNA पेक्षा कमी साठी 1U DNase I वापरा.
2. 5 mM च्या अंतिम एकाग्रतेमध्ये EDTA जोडले जावे जेणेकरुन RNA एंझाइमच्या निष्क्रियतेच्या वेळी खराब होण्यापासून वाचवा.
