रोबस्टार्ट टाक डीएनए पॉलिमरेझ
रोबस्टार्ट टाक डीएनए पॉलिमरेझ हे हॉट स्टार्ट डीएनए पॉलिमरेझ आहे.हे उत्पादन केवळ PCR प्रणाली तयार करण्याच्या आणि प्रवर्धनाच्या प्रक्रियेत प्राइमर्सच्या गैर-विशिष्ट ॲनिलिंग किंवा प्राइमर एकत्रीकरणामुळे होणारी गैर-विशिष्ट प्रतिक्रिया अधिक चांगल्या प्रकारे रोखू शकत नाही.म्हणून, त्याची उत्कृष्ट विशिष्टता आहे आणि कमी एकाग्रता टेम्पलेट्सच्या प्रवर्धनासाठी ते अधिक प्रभावी आहे, आणि ते मल्टीप्लेक्स पीसीआर प्रवर्धक प्रतिक्रियासाठी योग्य आहे.शिवाय, या उत्पादनात खूप चांगली लागू आहे आणि विविध प्रकारच्या PCR प्रतिक्रियांमध्ये स्थिर प्रवर्धन परिणाम मिळू शकतात.
घटक
1.5 U/μL रोबस्टार्ट Taq DNA पॉलिमरेज
2.10 × PCR बफर II (Mg²+ मोफत) (पर्यायी)
3.25 mM MgCl2(पर्यायी)
* 10 × PCR बफर II (Mg²+ विनामूल्य) मध्ये dNTP आणि Mg²+ समाविष्ट नाही, कृपया dNTP आणि MgCl जोडा2प्रतिक्रिया प्रणाली तयार करताना.
शिफारस केलेले अनुप्रयोग
1.जलद प्रवर्धन.
2.एकाधिक प्रवर्धन.
3.रक्त, swabs, आणि इतर नमुने थेट प्रवर्धन.
4.श्वसन रोग ओळखणे.
स्टोरेज स्थिती
दीर्घकालीन स्टोरेजसाठी -20°C, वापरण्यापूर्वी चांगले मिसळले पाहिजे, वारंवार फ्रीझ-थॉ टाळा.
*जर रेफ्रिजरेशन नंतर पर्जन्यवृष्टी होत असेल तर ते सामान्य आहे;मिश्रण आणि वापरण्यापूर्वी खोलीच्या तापमानाला समतोल राखण्याची शिफारस केली जाते.
युनिट व्याख्या
सक्रिय सॅल्मन शुक्राणू DNA चा टेम्पलेट/प्राइमर म्हणून वापर करून 30 मिनिटांसाठी 74°C तापमानात आम्ल-अघुलनशील पदार्थामध्ये 10 nmol डीऑक्सीरिबोन्यूक्लियोटाइड एंझाइमचे प्रमाण म्हणून एक सक्रिय युनिट (U) परिभाषित केले जाते.
गुणवत्ता नियंत्रण
1.SDS-PAGE इलेक्ट्रोफोरेटिक शुद्धता 98% पेक्षा जास्त.
2.प्रवर्धन संवेदनशीलता, बॅच-टू-बॅच नियंत्रण, स्थिरता.
3.एक्सोजेनस न्यूक्लिझ क्रियाकलाप नाही, एक्सोजेनस एंडोन्यूक्लिझ किंवा एक्सोन्यूक्लिझ दूषित नाही
सूचना
प्रतिक्रिया सेटअप
| घटक | खंड (μL) | अंतिम एकाग्रता |
| 10 × PCR बफर II (Mg²+ मोफत)a | 5 | 1× |
| dNTPs (10mM प्रत्येक dNTP) | 1 | 200 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 | 1-4 मिमी |
| रोबस्टार्ट टाक डीएनए पॉलिमरेझ (5U/μL) | ०.२५-०.५ | १.२५-२.५ यू |
| 25 × प्राइमर मिक्सb | 2 | 1× |
| साचा | - | 1 μg/प्रतिक्रिया |
| ddH2O | 50 पर्यंत | - |
टिपा:
1) अ.बफरमध्ये dNTP आणि Mg²+ समाविष्ट नाही, कृपया dNTP आणि MgCl जोडा2प्रतिक्रिया प्रणाली तयार करताना.
2) बी.qPCR/qRT-PCR साठी वापरल्यास, प्रतिक्रिया प्रणालीमध्ये फ्लोरोसेंट प्रोब जोडल्या पाहिजेत.सहसा, 0.2 μM ची अंतिम प्राइमर एकाग्रता चांगले परिणाम देईल;प्रतिक्रिया कार्यक्षमता खराब असल्यास, प्राइमर एकाग्रता 0.2-1 μM च्या श्रेणीमध्ये समायोजित केली जाऊ शकते.प्रोब एकाग्रता सामान्यतः 0.1-0.3 μM च्या श्रेणीमध्ये ऑप्टिमाइझ केली जाते.प्राइमर आणि प्रोबचे सर्वोत्तम संयोजन शोधण्यासाठी एकाग्रता ग्रेडियंट प्रयोग केले जाऊ शकतात.
थर्मल सायकलिंग प्रोटोकॉल
| नियमित पीसीआरप्रक्रिया | |||
| पाऊल | तापमान | वेळ | सायकल |
| प्री-डिनेच्युरेशन | 95℃ | 1-5 मि | 1 |
| विकृतीकरण | 95℃ | 10-20 से | 40-50 |
| एनीलिंग / विस्तार | 56-64℃ | 20-60 से | |
| वेगवान पीसीआरप्रक्रिया | |||
| पाऊल | तापमान | वेळ | सायकल |
| प्री-डिनेच्युरेशन | 95℃ | ३० से | 1 |
| विकृतीकरण | 95℃ | 1-5 से | 40-45 |
| एनीलिंग / विस्तार | 56-64℃ | 5-20 से | |
नोट्स
1.वेगवान डीएनए पॉलिमरेझचा प्रवर्धन दर 1 kb/10 s पेक्षा कमी नसावा.तापमान वाढ आणि घसरण दर, तापमान नियंत्रण मोड आणि वेगवेगळ्या पीसीआर उपकरणांची उष्णता वाहक कार्यक्षमता मोठ्या प्रमाणात बदलते, म्हणून विशिष्ट वेगवान पीसीआर उपकरणासाठी इष्टतम प्रतिक्रिया परिस्थिती अनुकूल करण्याची शिफारस केली जाते.
2.उच्च विशिष्टता आणि संवेदनशीलतेसह, प्रणाली अत्यंत अनुकूल आहे.
3.उच्च संवेदनशीलता पीसीआर शोध अभिकर्मक म्हणून वापरण्यासाठी योग्य, आणि मल्टीप्लेक्स पीसीआर प्रवर्धन प्रतिक्रियांमध्ये वापरले जाऊ शकते.
4.5′→3′ पॉलिमरेज क्रियाकलाप, 5′→3′ exonuclease क्रियाकलाप;नाही 3′→5′ exonuclease क्रियाकलाप;कोणतेही प्रूफरीडिंग कार्य नाही.
5.PCR आणि RT-PCR च्या गुणात्मक आणि परिमाणात्मक चाचणीसाठी योग्य.
6.PCR उत्पादनाचा 3′ शेवट A आहे, जो थेट T वेक्टरमध्ये क्लोन केला जाऊ शकतो.
7.कमी ॲनिलिंग तापमान असलेल्या प्राइमर्ससाठी किंवा 200 bp पेक्षा जास्त लांबीच्या तुकड्यांच्या प्रवर्धनासाठी तीन-चरण पद्धतीची शिफारस केली जाते.
