अल्ट्रा न्यूक्लीज
अल्ट्रान्यूक्लीझ हे सेराटिया मार्सेसेन्सपासून प्राप्त झालेले अनुवांशिकदृष्ट्या इंजिनीयर केलेले डेंडोन्यूक्लेझ आहे, जे डीएनए किंवा आरएनए, दुहेरी किंवा सिंगल स्ट्रँडेड, रेषीय किंवा वर्तुळाकार, विस्तीर्ण स्थितीत न्यूक्लिक ॲसिड पूर्णपणे 5'-मोनोफॉस्फेट-ओलिगॉन 5'-मोनोफॉस्फेट-ओलिगॉन्सेसेन्समध्ये कमी करण्यास सक्षम आहे. .अनुवांशिक अभियांत्रिकी बदलानंतर, उत्पादनास एस्चेरिचिया कोली (ई. कोली) मध्ये आंबवले गेले, व्यक्त केले गेले आणि शुद्ध केले गेले, जे सेल सुपरनॅटंट आणि सेल लाइसेटची विस्कॉसिटी कमी करते वैज्ञानिक संशोधन, परंतु शुद्धीकरण कार्यक्षमता आणि प्रोटीनचे कार्यात्मक संशोधन देखील सुधारते.हे जीन थेरपी, विषाणू शुद्धीकरण, लस उत्पादन, प्रोटीन आणि पॉलिसेकेराइड फार्मास्युटिकल उद्योगात यजमान अवशेष न्यूक्लिक ॲसिड काढण्याचे अभिकर्मक म्हणून वापरले जाऊ शकते.
उत्पादन वैशिष्ट्ये
| CAS क्र. | 9025-65-4 |
| ईसी क्र. | |
| आण्विक वजन | 30kDa |
| आयसोइलेक्ट्रिक पॉइंट | ६.८५ |
| प्रथिने शुद्धता | ≥99% (SDS-PAGE आणि SEC-HPLC) |
| विशिष्ट क्रियाकलाप | ≥१.1×106U/mg |
| इष्टतम तापमान | ३७°से |
| इष्टतम पीएच | ८.० |
| Protease क्रियाकलाप | नकारात्मक |
| बायोबर्डन | ~10CFU/100,000U |
| अवशिष्ट यजमान-सेल प्रथिने | ≤10ppm |
| वजनदार धातू | ≤10ppm |
| बॅक्टेरियल एंडोटॉक्सिन | ~0.25EU/1000U |
| स्टोरेज बफर | 20mM Tris-HCl, pH 8.0, 2mM MgCl2 ， 20mM NaCl, 50% ग्लिसरॉल |
स्टोरेज परिस्थिती
≤0°C वाहतूक；-25~-15°C स्टोरेज，2 वर्षांची वैधता (गोठवणे-विरघळणे टाळा).
युनिट व्याख्या
△A260 चे शोषण मूल्य 37 °C वर 30 मिनिटांच्या आत 1.0 ने बदलण्यासाठी वापरल्या जाणाऱ्या एन्झाईमची मात्रा, pH 8.0, ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड्समध्ये कापून पचलेल्या 37μg सॅल्मन स्पर्म डीएनएच्या समतुल्य, सक्रिय युनिट (U) म्हणून परिभाषित केले गेले.
गुणवत्ता नियंत्रण
अवशिष्ट यजमान-सेल प्रथिने: एलिसा किट
•प्रोटीज अवशेष: 250KU/mL अल्ट्रान्यूक्लीजने 60 मिनिटांसाठी सब्सट्रेटसह प्रतिक्रिया दिली, कोणतीही गतिविधी आढळली नाही.
•बॅक्टेरियल एंडोटॉक्सिन: LAL-चाचणी, औषधोपचार पीपल्स रिपब्लिक ऑफ चायना खंड 4 (2020 संस्करण) जेल मर्यादा चाचणी पद्धत.सामान्य नियम (1143).
•बायोबर्डन: पीपल्स रिपब्लिक ऑफ चायना चा फार्माकोपिया खंड 4 (2020 आवृत्ती)- सामान्य
स्टेरिलिटी टेस्ट (1101), PRC राष्ट्रीय मानक, GB 4789.2-2016 साठी नियम.
•वजनदार धातू:ICP-AES, HJ776-2015.
ऑपरेशन
जेव्हा SDS एकाग्रता 0.1% किंवा EDTA पेक्षा जास्त होती तेव्हा अल्ट्रान्यूक्लीज क्रियाकलाप लक्षणीयरीत्या प्रतिबंधित होते
एकाग्रता 1mM पेक्षा जास्त होती. Surfactant Triton X- 100, Tween 20 आणि Tween 80 चा न्यूक्लिझवर कोणताही परिणाम झाला नाही
गुणधर्म जेव्हा एकाग्रता 1.5% पेक्षा कमी होते.
| ऑपरेशन | इष्टतम ऑपरेशन | वैध ऑपरेशन |
| तापमान | 37℃ | 0-45℃ |
| pH | ८.०-९.२ | ६.०- ११.० |
| Mg2+ | 1-2 मिमी | 1- 15 मिमी |
| डीटीटी | 0- 100 मिमी | >100 मिमी |
| 2-Mercaptoethanol | 0- 100 मिमी | >100 मिमी |
| मोनोव्हॅलेंट मेटल आयन (Na+, K+ इ.) | 0-20 मिमी | 0-200 मिमी |
| PO43- | 0- 10 मिमी | 0- 100 मिमी |
वापर आणि डोस
• लस उत्पादनांमधून एक्सोजेनस न्यूक्लिक ॲसिड काढून टाका, अवशिष्ट न्यूक्लिक ॲसिड विषारीपणाचा धोका कमी करा आणि उत्पादनाची सुरक्षितता सुधारा.
• न्यूक्लिक ॲसिडमुळे होणाऱ्या खाद्य द्रवाची स्निग्धता कमी करा, प्रक्रियेची वेळ कमी करा आणि प्रथिने उत्पन्न वाढवा.
• न्यूक्लिक ॲसिड काढून टाका ज्याने कण गुंडाळला होता (व्हायरस, समावेश शरीर, इ.), जे अनुकूल आहे
कण सोडणे आणि शुद्ध करणे.
| प्रायोगिक प्रकार | प्रथिने उत्पादन | व्हायरस, लस | सेल औषधे |
| सेल नंबर | 1 ग्रॅम सेल ओले वजन (10ml बफरसह पुन्हा निलंबित) | 1L आंबायला ठेवा द्रव वरवरचा पदार्थ | 1L संस्कृती |
| किमान डोस | 250U | 100U | 100U |
| शिफारस केलेले डोस | 2500U | 25000U | 5000U |
• न्यूक्लीज उपचार स्तंभ क्रोमॅटोग्राफी, इलेक्ट्रोफोरेसीस आणि ब्लॉटिंग विश्लेषणासाठी नमुन्याचे निराकरण आणि पुनर्प्राप्ती सुधारू शकतात.
• जीन थेरपीमध्ये, शुद्ध एडिनो-संबंधित विषाणू मिळविण्यासाठी न्यूक्लिक ॲसिड काढून टाकले जाते.
