Bst 2.0 DNA पॉलिमरेझ (ग्लिसेरॉल मुक्त)
Bst DNA पॉलिमरेझ V2 हे बॅसिलस स्टीरोथर्मोफिलस DNA पॉलिमरेझ I पासून प्राप्त झाले आहे, ज्यामध्ये 5′→3′ DNA पॉलिमरेझ क्रियाकलाप आणि मजबूत साखळी बदलण्याची क्रिया आहे, परंतु 5′→3′ exonuclease क्रियाकलाप नाही.Bst DNA Polymerase V2 हे स्ट्रँड-डिस्प्लेसमेंट, आइसोथर्मल ॲम्प्लीफिकेशन LAMP (लूप मेडिएटेड आइसोथर्मल ॲम्प्लिफिकेशन) आणि रॅपिड सिक्वेन्सिंगसाठी योग्य आहे.
घटक
| घटक | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolymerase V2(ग्लिसेरॉल-मुक्त)(8U/μL) | 0.2 मिली | 1 मिली | 10 मिली |
| 10×HC Bst V2 बफर | 1.5 मिली | 2×1.5 मिली | 3×10 मिली |
| MgSO4(100mm) | 1.5 मिली | 2×1.5 मिली | 2×10 मिली |
अर्ज
1.LAMP समतापीय प्रवर्धन
2.DNA स्ट्रँड एकल विस्थापन प्रतिक्रिया
3. उच्च GC जनुक अनुक्रम
4. नॅनोग्राम पातळीचे डीएनए अनुक्रम.
स्टोरेज स्थिती
वाहतूक 0°C च्या खाली आणि -25°C~-15°C वर साठवली जावी.
युनिट व्याख्या
65 डिग्री सेल्सिअस तापमानात 30 मिनिटांत 25 एनएमओएल डीएनटीपी ऍसिड अघुलनशील पदार्थामध्ये समाविष्ट करणारे एन्झाइमचे प्रमाण म्हणून एक युनिट परिभाषित केले जाते.
गुणवत्ता नियंत्रण
1.प्रथिने शुद्धता परख (SDS-PAGE):Bst DNA पॉलिमरेझ V2 ची शुद्धता ≥99% कूमासी ब्लू डिटेक्शन वापरून SDS-PAGE विश्लेषणाद्वारे निर्धारित केली जाते.
2.Exonuclease क्रियाकलाप:1 μg λ -हिंद Ⅲ डायजेस्ट डीएनए 37 ℃ वर 16 तासांपर्यंत Bst DNA पॉलिमरेझ V2 ची किमान 8 U असलेली 50 μL प्रतिक्रियेचे उष्मायन केल्याने निर्धारित केल्याप्रमाणे कोणताही ऱ्हास होत नाही.
3.Nickase क्रियाकलाप:1 μg pBR322 DNA सोबत किमान 8 U Bst DNA पॉलिमरेझ V2 असलेली 50 μL प्रतिक्रिया 37°C तापमानावर 16 तासांसाठी उष्मायन केल्याने निर्धारित केल्याप्रमाणे कोणताही ऱ्हास होत नाही.
4.RNase क्रियाकलाप:1.6 μg MS2 RNA सह 1.6 μg MS2 RNA किमान 8 U Bst DNA पॉलिमरेझ V2 असलेली 50 μL प्रतिक्रिया 37°C तापमानात 16 तासांसाठी उष्मायन केल्याने निर्धारित केल्याप्रमाणे कोणतेही ऱ्हास होत नाही.
5.ई. कोलाय डीएनए:E. coli 16S rRNA लोकससाठी विशिष्ट प्राइमर्ससह TaqMan qPCR वापरून E. coli genomic DNA च्या उपस्थितीसाठी Bst DNA पॉलिमरेझ V2 चे 120 U तपासले जाते.ई. कोलाई जीनोमिक डीएनए दूषितता ≤1 कॉपी आहे.
LAMP प्रतिक्रिया
| घटक | २५μL |
| 10×HC Bst V2 बफर | 2.5 μL |
| MgSO4 (100mm) | 1.5 μL |
| dNTPs (10mm प्रत्येक) | 3.5 μL |
| SYTO™ 16 हिरवा (25×)a | 1.0 μL |
| प्राइमर मिक्सb | 6 μL |
| Bst DNA पॉलिमरेझ V2 (ग्लिसेरॉल-मुक्त) (8 U/uL) | 1 μL |
| साचा | × μL |
| ddH₂O | 25 μL पर्यंत |
टिपा:
1) अ.SYTOTM 16 Green (25×): प्रायोगिक गरजांनुसार, इतर रंगांचा वापर पर्याय म्हणून केला जाऊ शकतो;
2) बी.प्राइमर मिक्स: 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2.5 µ M F3, 2.5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB आणि इतर खंड मिक्स करून मिळवले.
प्रतिक्रिया आणि स्थिती
1 × HC Bst V2 बफर, उष्मायन तापमान 60°C आणि 65°C दरम्यान असते.
उष्णता निष्क्रियता
80 °C, 20 मिनिटे
