सीएचओ एचसीपी एलिसा किट
या तपासणीमध्ये एक-चरण इम्युनोसॉर्बेंट एलिसा पद्धत वापरली जाते.CHOK1 HCP असलेले नमुने एकाच वेळी HRP-लेबल असलेल्या शेळीच्या अँटी-CHOK1 अँटीबॉडी आणि एलिसा प्लेटवर लेपित अँटी-CHOK1 अँटीबॉडीवर प्रतिक्रिया देतात, शेवटी सॉलिड-फेज अँटीबॉडी-HCP-लेबल ॲन्टीबॉडीचे सँडविच कॉम्प्लेक्स तयार करतात.ELISA प्लेट धुवून अनबाउंड अँटीजेन-अँटीबॉडी काढून टाकले जाऊ शकते.पुरेशा प्रतिक्रियेसाठी TMB सब्सट्रेट विहिरीत जोडले जाते.स्टॉप सोल्यूशन जोडल्यानंतर रंग विकास थांबविला जातो आणि 450/650nm वर प्रतिक्रिया सोल्यूशनचे OD किंवा शोषक मूल्य मायक्रोप्लेट रीडरने वाचले जाते.OD मूल्य किंवा शोषक मूल्य हे द्रावणातील HCP सामग्रीच्या प्रमाणात आहे.यावरून, द्रावणातील एचसीपी एकाग्रता प्रमाणित वक्रानुसार मोजली जाऊ शकते.
अर्ज
या किटचा वापर नमुन्यांमधील CHOK1 होस्ट सेल प्रोटीन अवशेषांची परिमाणात्मकरित्या शोधण्यासाठी केला जातो.
Cघटक
| S/N | घटक | एकाग्रता | स्टोरेज अटी |
| 1 | CHOK1 HCP मानक | 0.5mg/mL | ≤–२०℃ |
| 2 | विरोधी CHO HCP-HRP | 0.5mg/mL | ≤–२०℃, प्रकाशापासून संरक्षण करा |
| 3 | TMB | NA | 2-8℃, प्रकाशापासून संरक्षण करा |
| 4 | 20 × PBST 0.05% | NA | 2-8℃ |
| 5 | उपाय थांबवा | NA | RT |
| 6 | मायक्रोप्लेट सीलर्स | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8℃ |
| 8 | उच्च शोषण पूर्व-कोटिंग प्लेट्स | NA | 2-8℃ |
उपकरणे आवश्यक
| उपभोग्य वस्तू / उपकरणे | निर्मिती | कॅटलॉग |
| मायक्रोप्लेट वाचक | आण्विक उपकरणे | स्पेक्ट्रा मॅक्स M5, M5e किंवा समतुल्य |
| थर्मोमिक्सर | एपेनडॉर्फ | Eppendorf/5355, किंवा समतुल्य |
| व्होर्टेक्स मिक्सर | आयकेए | MS3 डिजिटल, किंवा समतुल्य |
स्टोरेज आणि स्थिरता
1.-25~-15°C वर वाहतूक.
2.तक्ता 1 मध्ये दर्शविल्याप्रमाणे स्टोरेज अटी आहेत;घटक 1-2 साठवले जातात ≤–20°C,5-6 साठवले जातात RT,3、4、7、8 2-8℃ वर साठवले जाते;वैधता कालावधी 12 महिने आहे.
उत्पादन मापदंड
1.संवेदनशीलता: 1ng/mL
2.शोध श्रेणी: 3- 100ng/mL
3.अचूकता: इंट्रा-परीक्षा CV≤ 10%, इंटर-परीक्षण CV≤ 15%
4.HCP कव्हरेज: >80%
५.विशिष्टता: हे किट सार्वत्रिक आहे कारण ते शुद्धीकरण प्रक्रियेपासून स्वतंत्रपणे CHOK1 HCP वर प्रतिक्रिया देते.
अभिकर्मक तयारी
१.PBST ०.०५%
ddH मध्ये पातळ केलेले 20×PBST 0.05% चे 15 मिली घ्या2ओ, आणि 300 मि.ली. पर्यंत बनलेले.
2.1.0% BSA
बाटलीतून 1g BSA घ्या आणि 100 ml PBST 0.05% मध्ये पातळ करा, पूर्णपणे विरघळत नाही तोपर्यंत चांगले मिसळा आणि 2-8°C वर साठवा.तयार केलेले डायल्युशन बफर 7 दिवसांसाठी वैध आहे.आवश्यकतेनुसार तयार करण्याची शिफारस केली जाते.
3.शोध समाधान 2μg/mL
0.5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP चे 48μL घ्या आणि 2μg/mL शोध द्रावणाची अंतिम एकाग्रता मिळविण्यासाठी 1% BSA च्या 11,952μL मध्ये पातळ करा.
4.QC आणि CHOK1 HCP मानकांची तयारी
| ट्यूब नाही. | मूळ | एकाग्रता | खंड | 1% BSA | एकूण खंड | अंतिम |
| A | मानक | 0.5mg/mL | 10 | ४९० | ५०० | 10,000 |
| B | A | 10,000 | 50 | ४५० | ५०० | 1,000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | ४५० | ५०० | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | १७५ | ३७५ | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | ३५० | ५०० | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
तक्ता: QC आणि मानके तयार करणे
परख प्रक्रिया
१.वरील "अभिकर्मक तयारी" मध्ये दर्शविल्याप्रमाणे अभिकर्मक तयार करा.
2.प्रत्येक विहिरीत 50μL मानके, नमुने आणि QC (टेबल 3 पहा) घ्या, नंतर 100μL डिटेक्शन सोल्यूशन (2μg/mL) घाला;प्लेट सीलरने झाकून ठेवा आणि ELISA प्लेट थर्मोमिक्सरवर ठेवा.500rpm, 25±3℃ वर 2 तास उष्मायन करा.
3.सिंकमधील मायक्रोप्लेट उलटा करा आणि कोटिंग सोल्यूशन टाकून द्या.एलिसा प्लेट धुण्यासाठी प्रत्येक विहिरीत PBST 0.05% चे 300μL पिपेट टाका आणि द्रावण टाकून द्या आणि 3 वेळा पुन्हा धुवा.एका स्वच्छ पेपर टॉवेलवर प्लेट उलटा करा आणि कोरडे करा.
4.प्रत्येक विहिरीला 100μL of TMB सब्सट्रेट (तक्ता 1 पहा) जोडा, ELISA प्लेट सील करा आणि 15 मिनिटांसाठी 25±3℃ वर अंधारात उबवा.
५.प्रत्येक विहिरीत 100μL स्टॉप सोल्यूशन पिपेट करा.
6.मायक्रोप्लेट रीडरसह 450/650nm तरंगलांबीवरील शोषकता मोजा.
७.SoftMax किंवा समतुल्य सॉफ्टवेअरद्वारे डेटाचे विश्लेषण करा.चार-पॅरामीटर लॉजिस्टिक रीग्रेशन मॉडेल वापरून मानक वक्र प्लॉट करा.
मानक वक्र उदाहरण
टीप: नमुन्यातील एचसीपीची एकाग्रता मानक वक्रच्या वरच्या मर्यादेपेक्षा जास्त असल्यास, चाचणीपूर्वी ते डायल्यूशन बफरसह योग्यरित्या पातळ करणे आवश्यक आहे.
नोट्स
स्टॉप सोल्यूशन 2M सल्फ्यूरिक ऍसिड आहे, कृपया स्प्लॅशिंग टाळण्यासाठी काळजीपूर्वक हाताळा!
