माऊस जीनोटाइपिंग किट
मांजर क्रमांक: HCR2021A
हे उत्पादन डीएनए क्रूड एक्सट्रॅक्शन आणि पीसीआर ॲम्प्लीफिकेशन सिस्टमसह माऊस जीनोटाइपची जलद ओळख करण्यासाठी डिझाइन केलेले एक किट आहे.लायसिस बफर आणि प्रोटीनेज के द्वारे साध्या क्लीवेजनंतर माऊस टेल, कान, पायाचे बोट आणि इतर ऊतकांमधून थेट पीसीआर प्रवर्धनासाठी उत्पादन वापरले जाऊ शकते.रात्रभर पचन, फिनॉल-क्लोरोफॉर्म काढणे किंवा स्तंभ शुद्धीकरण नाही, जे सोपे आहे आणि प्रयोगांसाठी लागणारा वेळ कमी करते.उत्पादन 2kb पर्यंतच्या लक्ष्य तुकड्यांच्या वाढीसाठी आणि 3 जोड्या प्राइमर्ससह मल्टीप्लेक्स PCR प्रतिक्रियांसाठी योग्य आहे.2×माऊस टिश्यू डायरेक्ट पीसीआर मिक्समध्ये अनुवांशिकरित्या इंजिनियर केलेले डीएनए पॉलिमरेज, एमजी असते2+, dNTPs आणि उच्च प्रवर्धक कार्यक्षमता आणि अवरोधक सहिष्णुता प्रदान करण्यासाठी एक ऑप्टिमाइझ बफर प्रणाली, जेणेकरुन PCR प्रतिक्रिया टेम्पलेट आणि प्राइमर्स जोडून आणि उत्पादनास 1× पर्यंत रीहायड्रेट करून पार पाडता येईल.या उत्पादनासह वाढवलेल्या पीसीआर उत्पादनामध्ये 3′ टोकाला एक प्रमुख “A” बेस आहे आणि शुद्धीकरणानंतर TA क्लोनिंगसाठी थेट वापरला जाऊ शकतो.
घटक
| घटक | आकार |
| 2×माऊस टिश्यू डायरेक्ट पीसीआर मिक्स | ५×१.० मिली |
| लिसिस बफर | 2×20mL |
| प्रथिने के | 800μL |
स्टोरेज अटी
उत्पादने -25~-15℃ वर 2 वर्षांसाठी साठवली पाहिजेत.विरघळल्यानंतर, लायसिस बफर अल्पकालीन एकाधिक वापरासाठी 2~8℃ वर साठवले जाऊ शकते आणि वापरताना चांगले मिसळा.
अर्ज
हे उत्पादन माऊस नॉकआउट विश्लेषण, ट्रान्सजेनिक शोध, जीनोटाइपिंग इत्यादींसाठी योग्य आहे.
वैशिष्ट्ये
१.साधे ऑपरेशन: जीनोमिक डीएनए काढण्याची गरज नाही;
2.वाइड ऍप्लिकेशन: विविध माउस टिश्यूजच्या थेट प्रवर्धनासाठी योग्य.
सूचना
१.जीनोमिक डीएनएचे प्रकाशन
1) लायसेट तयार करणे
टिश्यू लायसेट हे माऊस नमुन्यांच्या संख्येनुसार तयार केले जाते (उती लायसेट डोसनुसार साइटवर तयार केले पाहिजे आणि वापरासाठी पूर्णपणे मिसळले पाहिजे), आणि एका नमुन्यासाठी आवश्यक अभिकर्मकांचे प्रमाण खालीलप्रमाणे आहे:
| घटक | व्हॉल्यूम (μL) |
| प्रथिने के | 4 |
| लिसिस बफर | 200 |
2) नमुना तयार करणे आणि लायसिस
शिफारस केलेले ऊतक वापर
| त्या प्रकारचेऊती | शिफारस केलेला खंड |
| उंदराची शेपटी | 1-3 मिमी |
| माऊस कान | 2-5 मिमी |
| उंदराचे बोट | 1-2 तुकडे |
स्वच्छ सेंट्रीफ्यूज ट्यूबमध्ये माऊस टिश्यूचे नमुने योग्य प्रमाणात घ्या, प्रत्येक सेंट्रीफ्यूज ट्यूबमध्ये 200μL ताजे टिश्यू लायसेट घाला, भोवरा आणि शेक करा, नंतर 30 मिनिटांसाठी 55℃ वर उबवा आणि नंतर 3 मिनिटांसाठी 98℃ वर गरम करा.
3) सेंट्रीफ्यूगेशन
लायसेटला चांगले हलवा आणि 12,000 rpm वर 5 मिनिटे सेंट्रीफ्यूज करा.सुपरनॅटंटचा वापर पीसीआर प्रवर्धनासाठी टेम्पलेट म्हणून केला जाऊ शकतो.जर टेम्प्लेट स्टोरेजसाठी आवश्यक असेल तर, सुपरनॅटंटला दुसर्या निर्जंतुकीकरण सेंट्रीफ्यूज ट्यूबमध्ये स्थानांतरित करा आणि 2 आठवड्यांसाठी -20℃ वर ठेवा.
2.पीसीआर प्रवर्धन
2×माऊस टिश्यू डायरेक्ट पीसीआर मिक्स -20℃ वरून काढा आणि बर्फावर वितळवा, उलटा मिसळा आणि खालील तक्त्यानुसार PCR प्रतिक्रिया प्रणाली तयार करा (बर्फावर चालवा):
| घटक | 25μLप्रणाली | 50μLप्रणाली | अंतिम एकाग्रता |
| 2×माऊस टिश्यू डायरेक्ट पीसीआर मिक्स | 12.5μL | 25μL | 1× |
| प्राइमर 1 (10μM) | 1.0μL | 2.0μL | 0.4μM |
| प्राइमर 2 (10μM) | 1.0μL | 2.0μL | 0.4μM |
| क्लीव्हेज उत्पादनa | आवश्यकतेनुसार | आवश्यकतेनुसार |
|
| ddH2O | 25μL पर्यंत | 50μL पर्यंत |
|
टीप:
अ) जोडलेली रक्कम प्रणालीच्या 1/10 पेक्षा जास्त नसावी आणि जर जास्त प्रमाणात जोडली गेली तर पीसीआर प्रवर्धन प्रतिबंधित केले जाऊ शकते.
शिफारस केलेल्या पीसीआर अटी
| सायकल पायरी | टेंप. | वेळ | सायकल |
| प्रारंभिक विकृतीकरण | 94℃ | ५ मिनिटे | 1 |
| विकृतीकरण | 94℃ | ३०से | 35-40 |
| एनीलिंगa | Tm+3~5℃ | ३०से | |
| विस्तार | 72℃ | 30 सेकंद/kb | |
| अंतिम विस्तार | 72℃ | ५ मिनिटे | 1 |
| - | 4℃ | धरा | - |
टीप:
अ) एनीलिंग तापमान: प्राइमरच्या Tm मूल्याच्या संदर्भात, प्राइमरच्या +3~5℃ च्या लहान Tm मूल्यावर ॲनिलिंग तापमान सेट करण्याची शिफारस केली जाते.
सामान्य समस्या आणि उपाय
१.लक्ष्यित पट्ट्या नाहीत
1) अत्यधिक लिसिस उत्पादन.टेम्पलेटची सर्वात योग्य रक्कम निवडा, सामान्यत: सिस्टमच्या 1/10 पेक्षा जास्त नाही;
2) नमुना आकार खूप मोठा आहे.लाइसेट १० वेळा पातळ करा आणि नंतर वाढवा, किंवा नमुना आकार कमी करा आणि री-लिसिस करा;
3) ऊतींचे नमुने ताजे नसतात.ताजे ऊतींचे नमुने वापरण्याची शिफारस केली जाते;
4) गरीब प्राइमर गुणवत्ता.प्राइमर गुणवत्ता सत्यापित करण्यासाठी आणि प्राइमर डिझाइन ऑप्टिमाइझ करण्यासाठी प्रवर्धनासाठी जीनोमिक डीएनए वापरा.
2.गैर-विशिष्ट प्रवर्धन
1) ॲनिलिंग तापमान खूप कमी आहे आणि सायकल क्रमांक खूप जास्त आहे.एनीलिंग तापमान वाढवा आणि चक्रांची संख्या कमी करा;
2) टेम्पलेट एकाग्रता खूप जास्त आहे.प्रवर्धनानंतर टेम्प्लेटचे प्रमाण कमी करा किंवा टेम्प्लेट 10 वेळा पातळ करा;
3) गरीब प्राइमर विशिष्टता.प्राइमर डिझाइन ऑप्टिमाइझ करा.
नोट्स
१.नमुन्यांमधील क्रॉस दूषित होण्यापासून टाळण्यासाठी, एकापेक्षा जास्त सॅम्पलिंग टूल्स तयार केले पाहिजेत आणि जर वारंवार वापरण्याची आवश्यकता असेल तर प्रत्येक सॅम्पलिंगनंतर टूल्सची पृष्ठभाग 2% सोडियम हायपोक्लोराईट द्रावण किंवा न्यूक्लिक ॲसिड क्लीनरने स्वच्छ केली जाऊ शकते.
2.ताजे माऊस टिश्यूज वापरण्याची शिफारस केली जाते आणि प्रवर्धन परिणामांवर परिणाम होऊ नये म्हणून सॅम्पलिंग व्हॉल्यूम खूप मोठा नसावा.
3.लायसिस बफरने वारंवार फ्रीझ-थॉ टाळले पाहिजे आणि अल्पकालीन एकाधिक वापरासाठी 2~8℃ वर साठवले जाऊ शकते.कमी तापमानात साठवल्यास, पर्जन्यवृष्टी होऊ शकते आणि वापरण्यापूर्वी पूर्णपणे विरघळली पाहिजे.
4.PCR मिक्स वारंवार फ्रीझ-थॉ टाळले पाहिजे आणि अल्पकालीन पुनरावृत्ती वापरण्यासाठी 4℃ वर साठवले जाऊ शकते.
५.हे उत्पादन केवळ वैज्ञानिक प्रायोगिक संशोधनासाठी आहे आणि क्लिनिकल निदान किंवा उपचारांमध्ये वापरले जाऊ नये.
