DNase I (Rnase फ्री)(5u/ul)
मांजर क्रमांक: HC4007A
DNase I (Deoxyribonuclease I) एक एंडोडिओक्सायरिबोन्यूक्लीज आहे जो एकल- किंवा दुहेरी-असरलेल्या DNA पचवू शकतो.हे 5'-टर्मिनलवर फॉस्फेट गट आणि 3'-टर्मिनलवर हायड्रॉक्सिलसह मोनोडॉक्सिन्युक्लियोटाइड्स किंवा सिंगल- किंवा डबल-स्ट्रँडेड ऑलिगोडिओक्सिन्युक्लियोटाइड्स तयार करण्यासाठी फॉस्फोडिएस्टर बंध ओळखते आणि तोडते.DNase I ची क्रिया Ca वर अवलंबून असते2+आणि Mn सारख्या द्विसंयोजक धातूच्या आयनद्वारे सक्रिय केले जाऊ शकते2+आणि Zn2+.5 मिमी Ca2+एंझाइमचे हायड्रोलिसिसपासून संरक्षण करते.यांच्या उपस्थितीत एम.जी2+, एंजाइम यादृच्छिकपणे डीएनएच्या कोणत्याही स्ट्रँडवरील कोणतीही साइट ओळखू शकतो आणि तोडू शकतो.च्या उपस्थितीत एम.एन2+, डीएनएच्या दुहेरी पट्ट्या एकाच वेळी ओळखल्या जाऊ शकतात आणि जवळजवळ त्याच ठिकाणी क्लीव्ह केल्या जाऊ शकतात ज्यामुळे फ्लॅट एंड डीएनए तुकडे किंवा 1-2 न्यूक्लियोटाइड्स पसरलेले चिकट शेवटचे डीएनए तुकडे तयार होतात.
घटक
| नाव | 0.1KU | 1KU | 5 कु | 50 KU |
| DNase I, RNase-मुक्त | 20μL | 200μL | 1 मिली | 10 मिली |
| 10×DNase I बफर | 1 मिली | 1 मिली | 5 × 1 मिली | 5 × 10 मिली |
स्टोरेज परिस्थिती
स्टोरेजसाठी -25℃~-15℃;बर्फ पॅक अंतर्गत वाहतूक.
सूचना
1. खाली सूचीबद्ध केलेल्या प्रमाणानुसार RNase-मुक्त ट्यूबमध्ये प्रतिक्रिया समाधान तयार करा:
| घटक | खंड |
| आरएनए | X µg |
| 10 × DNase I बफर | 1μL |
| DNase I, RNase-मुक्त (5U/μL) | 1 U प्रति µg RNA① |
| ddH2O | 10μL पर्यंत |
टीप: ① DNase I च्या व्हॉल्यूमची गणना करा जी RNA च्या प्रमाणावर आधारित जोडणे आवश्यक आहे.
2. 15 मिनिटांसाठी 37 ℃;
3. 2.5mM~5mM च्या अंतिम एकाग्रतेमध्ये 0.5M EDTA जोडा आणि प्रतिक्रिया थांबवण्यासाठी 10 मिनिटांसाठी 65℃ वर गरम करा.नमुना थेट पुढील प्रतिक्रियेसाठी वापरला जाऊ शकतो जसे की उलट प्रतिलेखनप्रयोग
युनिट व्याख्या
एक युनिट एन्झाईमचे प्रमाण म्हणून परिभाषित केले आहे जे pBR322 चे 1µg पूर्णपणे खराब करेलडीएनए 10 मिनिटांत 37 डिग्री सेल्सियस वर.
गुणवत्ता नियंत्रण
RNase:1.6µg MS2 RNA सह DNase I चे 5U 37℃ तापमानात 4 तासांसाठी कोणतेही ऱ्हास होत नाही.agarose जेल इलेक्ट्रोफोरेसीस द्वारे निर्धारित.
नोट्स
1. कृपया 0.5MEDTA स्वतः तयार करा.
2. RNA च्या प्रति µg 1U DNase I वापरा.तथापि, RNA 1µg पेक्षा कमी असल्यास, कृपया 1U DNase I वापरा.
3. ऑपरेशन दरम्यान कृपया एन्झाइम बर्फावर ठेवा.
