सुपरस्टार्ट qPCR प्रीमिक्स प्लस-UNG
मांजर क्रमांक: HCB5071E
सुपरस्टार्ट क्यूपीसीआर प्रीमिक्स प्लस-यूएनजी हे विशेषत: लिओफिलायझेशन प्रक्रियेसाठी विकसित केलेले प्रोब-आधारित शोध वापरून रिअल टाइम पीसीआर गुणात्मक आणि परिमाणात्मक प्रतिक्रियांसाठी डिझाइन केलेले एक विशेष अभिकर्मक आहे.यात एक नवीन हॉट-स्टार्ट एन्झाइम Hotstart Taq plus (DG) आहे, ज्यामध्ये त्याची Taq एन्झाईम क्रियाकलाप खोलीच्या तापमानावर बंद आहे, कमी तापमानाच्या परिस्थितीत प्राइमर नॉन-विशिष्ट ॲनिलिंग किंवा प्राइमर डायमर निर्मितीमुळे होणारे गैर-विशिष्ट प्रवर्धन प्रभावीपणे प्रतिबंधित करते, त्यामुळे सुधारणा होते. प्रवर्धन प्रतिक्रियेची विशिष्टता.हे अभिकर्मक जलद हॉट-स्टार्टिंग साध्य करण्यासाठी ऑप्टिमाइझ केलेल्या qPCR विशिष्ट बफर आणि UNG/dUTP अँटी-कंटेमिनेशन सिस्टमचा वापर करते, qPCR प्रतिक्रियांची कार्यक्षमता आणि संवेदनशीलता मोठ्या प्रमाणात सुधारते.हे प्रमाणीकरण क्षेत्राच्या विस्तृत श्रेणीमध्ये चांगले मानक वक्र मिळवू शकते आणि अचूकपणे परिमाण काढू शकते, अवशिष्ट पीसीआर उत्पादनांमुळे किंवा एरोसोल दूषिततेमुळे होणारे चुकीचे सकारात्मक प्रवर्धन प्रभावीपणे प्रतिबंधित करते.हे अभिकर्मक अप्लाइड बायोसिस्टम्स, एपेनडॉर्फ, बायो-रॅड आणि रोशे इत्यादी उत्पादकांकडील बहुतेक फ्लोरोसेंट परिमाणात्मक पीसीआर साधनांशी सुसंगत आहे आणि लायोफिलाइज्ड स्वरूपात चांगली स्थिरता प्रदर्शित करते.
अभिकर्मक रचना
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+मोफत) (डीजी)
2. 250 mM MgCl2
3. 4×लायप्रोटेक्टंट (पर्यायी)
स्टोरेज अटी
-20℃ वर दीर्घकालीन स्टोरेज;3 महिन्यांपर्यंत 4℃ वर साठवले जाऊ शकते.वापरण्यापूर्वी चांगले मिसळा आणिवारंवार गोठणे आणि वितळणे टाळा.
सायकलिंग प्रोटोकॉल
| कार्यपद्धती | टेंप. | वेळ | सायकल |
| पचन | 50℃ | 2 मि | 1 |
| पॉलिमरेझ सक्रियकरण | 95℃ | 1~5 मि | 1 |
| डेनचर | 95℃ | 10~20 से | 40-50 |
| एनीलिंग आणि विस्तार | 56~64℃ | 20~60 से | 40-50 |
qPCR लिक्विड रिॲक्शन Syस्टेम तयारी
|
रचना |
25µL व्हॉल्यूम |
50µL व्हॉल्यूम |
अंतिम एकाग्रता |
| 5×HotstartPremix प्लस-UNG(Mg2+मोफत) (डीजी) | ५µL | 10µL | 1× |
| 250mm MgCl2 | 0.45µL | 0.9µL | 4.5 मिमी |
| 4×लायोप्रोटेक्टंट1 | ६.२५µL | 12.5µL | 1× |
| 25×प्राइमर-प्रोब मिक्स2 | 1µL | 2µL | 1× |
| टेम्पलेट डीएनए3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | 25µL पर्यंत | 50µL पर्यंत | —— |
1. प्राइमर्ससाठी 0.2μM ची अंतिम एकाग्रता सहसा चांगले परिणाम देते;जेव्हा प्रतिक्रियेची कार्यक्षमता खराब असते, तेव्हा आवश्यकतेनुसार 0.2-1μM च्या श्रेणीमध्ये प्राइमर एकाग्रता समायोजित करा.इष्टतम संयोजन शोधण्यासाठी ग्रेडियंट प्रयोगांद्वारे प्रोब एकाग्रता सामान्यत: 0.1-0.3μM च्या श्रेणीमध्ये ऑप्टिमाइझ केली जाते.
2. विविध प्रकारच्या टेम्पलेट्समध्ये समाविष्ट असलेल्या लक्ष्य जनुकांची कॉपी संख्या बदलते;आवश्यक असल्यास, इष्टतम टेम्पलेट जोडण्याचे प्रमाण निर्धारित करण्यासाठी ग्रेडियंट डायल्युशन केले जाऊ शकते.
3. ही प्रणाली lyophilized जाऊ शकते;जेव्हा ग्राहक फ्रीझिंग-ड्रायिंग आवश्यकतांशिवाय ही प्रणाली वापरतात, तेव्हा 4×लायोप्रोटेक्टंट निवडकपणे जोडले जाऊ शकतात; फ्रीझ-वाळलेल्या उत्पादनांची आवश्यकता असल्यास, द्रव अभिकर्मक स्टेज उत्पादन कार्यप्रदर्शन प्रमाणीकरणादरम्यान, लायओफिलाइज्ड सिस्टम घटकांसह सुसंगतता सुनिश्चित करण्यासाठी 4×लायोप्रोटेक्टंट जोडणे आवश्यक आहे. आणि प्रभाव.
जेव्हा प्रणाली वापरली जातेd फ्रीझ-ड्रायिंगसाठी, तयार करा प्रणाली as खालील:
| रचना | 25µL प्रतिक्रिया प्रणाली |
| 5 ×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+मोफत) (डीजी) | ५µL |
| 250mm MgCl2 | 0.45µL |
| 4×लायोप्रोटेक्टंट | ६.२५µL |
| 25×प्राइमर-प्रोब मिक्स | 1µL |
| ddH2O | 18~20µL पर्यंत |
* फ्रीझ-ड्रायिंगसाठी इतर यंत्रणा आवश्यक असल्यास, कृपया स्वतंत्रपणे सल्ला घ्या.
लिओफिलायझेशन प्रक्रियाss
| कार्यपद्धती | टेंप. | वेळ | अट | दाब |
| प्री-फ्रीझिंग | 4℃ | ३० मि | धरा |
1 एटीएम |
| -50℃ | ६० मि | थंड करणे | ||
| -50℃ | 180 मि | धरा | ||
| प्राथमिक वाळवणे | -30℃ | ६० मि | गरम करणे |
अंतिम व्हॅक्यूम |
| -30℃ | ७० मि | धरा | ||
| दुय्यम वाळवणे | 25℃ | ६० मि | गरम करणे |
अंतिम व्हॅक्यूम |
| 25℃ | ३०० मि | धरा |
2. वरील लिओफिलायझेशन प्रक्रिया केवळ संदर्भासाठी आहे.भिन्न उत्पादनांचे प्रकार आणि भिन्न फ्रीझ-ड्रायर्समध्ये भिन्न मापदंड आहेत, त्यामुळे वास्तविकतेनुसार समायोजन केले जाऊ शकतेवापर दरम्यान परिस्थिती.
3. वेगवेगळ्या लायओफिलायझेशन प्रक्रिया वेगवेगळ्या बॅच आकाराच्या लिओफिलायझेशनसाठी योग्य असू शकतातउत्पादने, त्यामुळे मोठ्या प्रमाणात उत्पादनासाठी वापरताना पुरेसे चाचणी प्रमाणीकरण करणे आवश्यक आहे.
Lyophilize वापरण्यासाठी सूचनाd पावडर
1. लियोफिलाइज्ड पावडर थोडक्यात सेंट्रीफ्यूज करा;
2. लायोफिलाइज्ड पावडरमध्ये न्यूक्लिक ॲसिड टेम्प्लेट घाला आणि 25µL पर्यंत पाणी घाला;
3. सेंट्रीफ्यूगेशनने चांगले मिसळा आणि मशीनवर चालवा.
गुणवत्ता नियंत्रण:
1. कार्यात्मक चाचणी: qPCR ची संवेदनशीलता, विशिष्टता, पुनरुत्पादनक्षमता.
2. एक्सोजेनस न्यूक्लीज क्रियाकलाप नाही, एक्सोजेनस एंडो/एक्सोन्युक्लीज दूषितता नाही.
तांत्रिक माहिती:
1. सुपरस्टार्ट qPCR प्रीमिक्स प्लस-यूएनजी एक नवीन हॉट-स्टार्ट एन्झाइम वापरते जे 1~5 मिनिटांत जलद हॉट-स्टार्टिंग सक्षम करते;विशेष बफर फॉर्म्युलेशनद्वारे ते मल्टीप्लेक्स फ्लोरोसेंट परिमाणात्मक पीसीआर प्रतिक्रियांसाठी योग्य आहे.
2. यात उच्च विशिष्टता आहे जी फ्लूरोसेन्स परिमाणात्मक पीसीआर मर्यादा शोधण्याची संवेदनशीलता लक्षणीयरीत्या सुधारते, प्रवर्धन वक्र सामान्यीकरण बनवते, फ्लोरोसेन्स मूल्य कमी एकाग्रता टेम्पलेट्सवर स्पष्ट सुधारणा प्राप्त करते, उच्च संवेदनशीलता फ्लूरोसेन्स परिमाणात्मक पीसीआर शोध अभिकर्मक म्हणून योग्य.
3. कमी ॲनिलिंग तापमान किंवा 200bp तुकड्यांपेक्षा जास्त असलेल्या प्राइमर्ससाठी, 3-चरण पद्धतीची शिफारस केली जाते.
4. dUTP ची उपयोगक्षमता आणि UNG एंझाइमची संवेदनशीलता भिन्न लक्ष्य जनुकांसाठी भिन्न असते, अशा प्रकारे UNG प्रणाली वापरल्याने शोध संवेदनशीलता कमी होत असल्यास, प्रतिक्रिया प्रणाली समायोजित आणि अनुकूल केली पाहिजे.तांत्रिक समर्थन आवश्यक असल्यास, कृपया आमच्या कंपनीशी संपर्क साधा.
5. प्रवर्धनापूर्वी आणि नंतर समर्पित क्षेत्रे आणि पिपेट्स वापरा, ऑपरेशन दरम्यान हातमोजे घाला आणि त्यांना वारंवार बदला;पीसीआर उत्पादनांद्वारे नमुन्यांची दूषितता कमी करण्यासाठी पीसीआर पूर्ण झाल्यानंतर प्रतिक्रिया ट्यूब उघडू नका.
