M-MLV रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेस
RevScript रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेस जनुकीय अभियांत्रिकी तंत्रज्ञानाद्वारे प्राप्त केले जाते.यात उच्च सीडीएनए संश्लेषण क्षमता, थर्मल स्थिरता आणि प्रतिक्रिया तापमान मर्यादा (60 डिग्री सेल्सिअस पर्यंत) आहे.संश्लेषित cDNA उत्पादन 10 kb पर्यंत आहे.हे टेम्पलेट्सची आत्मीयता वाढवते आणि जटिल दुय्यम संरचना किंवा कमी कॉपी जीन्स असलेल्या RNA टेम्पलेट्सच्या उलट प्रतिलेखनासाठी योग्य आहे.
घटक
| घटक | HC2003B (10,000U) | HC2003B (5*10,000U) | HC2003B (200,000U) |
| RevScript रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेस (200U/μL) | 50 μL | 5×50 μL | 1 मिली |
| 5 × RevScript बफर | 250 μL | 1.25 मिली | 5 मिली |
स्टोरेज स्थिती
हे उत्पादन -25°C~-15°C वर 2 वर्षांसाठी साठवले पाहिजे.
युनिट व्याख्या
प्राइमर म्हणून ऑलिगो(dT) वापरून एक युनिट 10 मिनिटांत 37°C तापमानात 1 nmol dTTP आम्ल-अघुलनशील पदार्थामध्ये समाविष्ट करते.
प्रतिक्रिया सेटअप
1.आरएनए टेम्पलेटचे विकृतीकरण (ही पायरी ऐच्छिक आहे, आरएनए टेम्पलेटचे विकृतीकरण दुय्यम संरचना उघडण्यास मदत करते, ज्यामुळे पहिल्या स्ट्रँड सीडीएनएचे उत्पन्न सुधारेल.)
| घटक | खंड (μL) |
| RNase मुक्त ddH2O | ते 13 |
| ऑलिगो(dT)18 (५० μmol/L) किंवा यादृच्छिक प्राइमर (50 μmol/L) किंवा जनुक विशिष्ट प्राइमर्स (2 μmol/L) | 1 |
| किंवा 1 | |
| किंवा 1 | |
| आरएनए टेम्पलेट | X a |
टिपा:
1) a: एकूण RNA: 1-5 ug किंवा mRNA: 1-500 ng
2) 5 मिनिटे 65°C वर उष्मायन करा, नंतर 2 मिनिटे थंड होण्यासाठी लगेच बर्फावर स्थानांतरित करा.प्रतिक्रिया द्रव गोळा करण्यासाठी संक्षिप्त सेंट्रीफ्यूगेशन, खालील तक्त्यामध्ये दर्शविल्याप्रमाणे रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन रिॲक्शन सोल्यूशन जोडा.हलक्या हाताने पिपेट मिसळा.
१.प्रतिक्रिया मिश्रण तयार करणे (20 μL खंड)
| घटक | खंड (μL) |
| मागील चरणाचे मिश्रण | 13 |
| 5×बफर | 4 |
| dNTP मिक्स (10nmol/L) | 1 |
| रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेस (200 U/μL) | 1 |
| RNase अवरोधक (40 U/μL) | 1 |
1.खालील परिस्थितीनुसार प्रतिक्रिया करा:
| तापमान (°C) | वेळ |
| २५°सेa | ५ मिनिटे |
| ४२°सेb | 15-30 मिनिटे |
| ८५ °सेc | ५ मिनिटे |
टिपा:
1) अ.यादृच्छिक हेक्सॅमर वापरण्यासाठी 25°C वर 5 मिनिटे उष्मायन करणे आवश्यक आहे.Oligo (dT) वापरताना कृपया ही पायरी वगळा18किंवा जीन स्पेसिफिक प्राइमर.
2) बी.शिफारस केलेले रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन तापमान 42°C आहे, क्लिष्ट दुय्यम संरचना किंवा उच्च GC सामग्री असलेल्या टेम्पलेटसाठी, प्रतिक्रिया तापमान 50-55°C पर्यंत वाढवण्याची शिफारस केली जाते.
3) ग.रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेस निष्क्रिय करण्यासाठी 5 मिनिटांसाठी 85°C वर गरम करा.
4) उत्पादन थेट PCR किंवा qPCR प्रतिक्रियांमध्ये वापरले जाऊ शकते किंवा अल्पकालीन स्टोरेजसाठी -20°C वर साठवले जाऊ शकते.दीर्घकालीन स्टोरेजसाठी उत्पादनांना अलिगुट करून -80 डिग्री सेल्सिअस तापमानात साठवण्याची शिफारस केली जाते.वारंवार फ्रीझ-थॉ टाळा.
5) उत्पादन वन-स्टेप RT-qPCR साठी योग्य आहे, प्रत्येक 25μL प्रतिक्रिया प्रणालीसाठी 10-20 U रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेस जोडण्याची किंवा वास्तविक परिस्थितीनुसार रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेसचे प्रमाण हळूहळू वाढवण्याची शिफारस केली जाते.
नोट्स
1.कृपया प्रायोगिक क्षेत्र स्वच्छ ठेवा;ऑपरेशन दरम्यान स्वच्छ हातमोजे आणि मास्क परिधान केले पाहिजेत.RNase दूषित होण्यापासून रोखण्यासाठी प्रयोगात वापरल्या जाणाऱ्या सर्व उपभोग्य वस्तू RNase मुक्त असाव्यात.
2.आरएनए ऱ्हास टाळण्यासाठी सर्व प्रक्रिया बर्फावर केल्या पाहिजेत.
3.रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शनची उच्च कार्यक्षमता सुनिश्चित करण्यासाठी उच्च दर्जाच्या RNA नमुन्यांची शिफारस केली जाते.
4.हे उत्पादन केवळ संशोधनासाठी आहे.
5.कृपया तुमच्या सुरक्षिततेसाठी लॅब कोट आणि डिस्पोजेबल हातमोजे वापरून काम करा.
