तापमान संवेदनशील UNG
तापमान संवेदनशील UNG (TS-UNG) हे E. coli मधील रीकॉम्बिनंट अभिव्यक्तीद्वारे प्राप्त होते.एंजाइम युरेसिल-युक्त सिंगल- आणि डबल-स्ट्रँडेड डीएनए मधून मुक्त युरेसिल सोडण्यास उत्प्रेरित करते आणि आरएनए विरूद्ध निष्क्रिय आहे.E. coli जनुक उत्पत्तीच्या पारंपारिक UNG एंझाइमच्या तुलनेत, TS-UNG एंझाइममध्ये कमी तापमानात (20℃~37℃) जास्त क्रिया असते आणि ते तापमान संवेदनशील आणि सहज निष्क्रिय (50℃) असते, ज्यामुळे dUTP-युक्त प्रवर्धनाचा ऱ्हास टाळता येतो. पारंपारिक UNG एंझाइमच्या निष्क्रियतेनंतर राहतील अशा अवशिष्ट क्रियाकलापांद्वारे खोलीच्या तपमानावर उत्पादने.म्हणून, टीएस-यूएनजी एन्झाइम केवळ पीसीआर दूषित प्रतिबंधक प्रतिक्रियेसाठीच योग्य नाही, तर आरटी-पीसीआर प्रवर्धक कार्यक्रमाशी देखील चांगले जुळते आणि आरटी-पीसीआर प्रदूषण प्रतिबंधक प्रतिक्रियेमध्ये वापरले जाऊ शकते.
शिफारस केलेला अर्ज
प्रदूषण प्रतिबंध प्रवर्धन
स्टोरेज स्थिती
दीर्घकालीन स्टोरेजसाठी -20°C, वापरण्यापूर्वी चांगले मिसळले पाहिजे, वारंवार फ्रीझ-थॉ टाळा.
स्टोरेज बफर
20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, स्टॅबिलायझर, 50% ग्लिसरॉल.
युनिट व्याख्या
37°C तापमानावर 1 तासात 1µg सिंगल-स्ट्रँडेड DNA असलेले dU बेस डिग्रेड करण्यासाठी आवश्यक एंझाइमचे प्रमाण 1 एकक क्रियाकलाप (U) आहे.
गुणवत्ता नियंत्रण
1.SDS-PAGE इलेक्ट्रोफोरेटिक शुद्धता 98% पेक्षा जास्त
2.डिग्रेडेशन क्रियाकलाप, बॅच-टू-बॅच नियंत्रण, स्थिरता
3.एक्सोजेनस न्यूक्लिझ क्रियाकलाप नाही, एक्सोजेनस एंडोन्यूक्लिझ किंवा एक्सोन्यूक्लिझ दूषित नाही.
सूचना
| घटक | व्हॉल्यूम (μL) | अंतिम एकाग्रता |
| 10 × पीसीआर बफर (dNTP फ्री, Mg²+फुकट) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (dTTP बदला) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 मिमी |
| 5 U/μL Taq | ०.२५ | 1.25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | ०.५ (०.१-०.५) | 0.5 U (0.1-0.5U) |
| 25 × प्राइमर मिक्सa | 2 | 1× |
| साचा | - | 1μg/प्रतिक्रिया |
| ddH₂O | 50 पर्यंत | - |
टीप: a: qPCR/qRT-PCR साठी वापरल्यास, फ्लोरोसेंट प्रोब प्रतिक्रिया प्रणालीमध्ये जोडले जावे.सहसा, 0.2 μM ची अंतिम प्राइमर एकाग्रता चांगले परिणाम देऊ शकते;जेव्हा प्रतिक्रिया कार्यक्षमता खराब असते, तेव्हा प्राइमर एकाग्रता 0.2-1 μM च्या श्रेणीमध्ये समायोजित केली जाऊ शकते.सहसा, प्रोब एकाग्रता 0.1-0.3 μM च्या श्रेणीमध्ये ऑप्टिमाइझ केली जाते.प्राइमर आणि प्रोबचे सर्वोत्तम संयोजन शोधण्यासाठी एकाग्रता ग्रेडियंट प्रयोग केले जाऊ शकतात.
नोट्स
1.TS-UNG एंझाइमचे इष्टतम प्रतिक्रिया तापमान तुलनेने कमी आहे, आणि ते 20℃~37℃, एन्झाइमचे डोस आणि प्रतिक्रिया वेळ 0.1~0.5 U, 5~ च्या श्रेणीमध्ये ऑप्टिमाइझ केले जाऊ शकते. 10 मि;आणि एंझाइम रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शनच्या प्रक्रियेत निष्क्रिय केले जाऊ शकते.
2.ते PCR आणि RT-PCR साठी दूषित होऊ नये म्हणून योग्य आहे.
3.वारंवार फ्रीझ-थॉ टाळा आणि तापमानातील मोठ्या चढउतारांना सामोरे जाऊ नका.
4.वाढवल्या जाणाऱ्या भिन्न जनुकांमध्ये dUTP ची भिन्न उपयोग कार्यक्षमता आणि UNG एंझाइमची संवेदनशीलता असते, म्हणून, UNG प्रणालीच्या वापरामुळे शोध संवेदनशीलता कमी होत असल्यास, प्रतिक्रिया प्रणाली समायोजित आणि ऑप्टिमाइझ केली पाहिजे, जर आपल्याला तांत्रिक समर्थनाची आवश्यकता असेल तर कृपया संपर्क साधा आमची कंपनी.
