युरासिल डीएनए ग्लायकोसिलेस
Uracil-DNA Glycosylase (UNG किंवा UDG) हे 25 kDa च्या आण्विक वजनासह E.coli चे रीकॉम्बिनंट क्लोन आहे.हे uracil-युक्त सिंगल-स्ट्रँडेड आणि डबल-स्ट्रँडेड DNA मधून मुक्त uracil सोडण्यास उत्प्रेरित करते, आणि RNA विरुद्ध निष्क्रिय आहे, आणि PCR ॲम्प्लीफिकेशन उत्पादनांचे दूषित होण्यापासून रोखण्यासाठी वापरले जाऊ शकते.कृतीचे तत्त्व या वस्तुस्थितीवर आधारित आहे की जर पीसीआर प्रतिक्रियेमध्ये डीटीटीपीला डीयूटीपी बदलले आणि डीयू बेस असलेले पीसीआर प्रवर्धक उत्पादन तयार केले, तर एंजाइम निवडकपणे यू बेसचे ग्लायकोसिडिक बॉन्ड सिंगल-स्ट्रँडेड आणि डबल-स्ट्रँडेड तोडू शकते. डीएनए आणि पीसीआर ॲम्प्लीफिकेशन उत्पादन खराब करते.
शिफारस केलेला अर्ज
प्रदूषण प्रतिबंध प्रवर्धन
स्टोरेज स्थिती
दीर्घकालीन स्टोरेजसाठी -20°C, वापरण्यापूर्वी चांगले मिसळले पाहिजे, वारंवार फ्रीझ-थॉ टाळा.
स्टोरेज बफर
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, स्टॅबिलायझर, 50% ग्लिसरॉल.
युनिट व्याख्या
1µg सिंगल-स्ट्रँडेड DNA ज्यात dU बेस असलेले 1µg 37°C तापमानात 1 तासात डिग्रेड करण्यासाठी आवश्यक एंझाइमचे प्रमाण 1 युनिट आहे.
गुणवत्ता नियंत्रण
1.SDS-PAGE इलेक्ट्रोफोरेटिक शुद्धता 98% पेक्षा जास्त
2.प्रवर्धन संवेदनशीलता, बॅच-टू-बॅच नियंत्रण, स्थिरता
3.UNG च्या 1U वर 2mins साठी 50℃ वर उपचार केल्यानंतर, 103 पेक्षा कमी प्रती असलेले U असलेले टेम्प्लेट पूर्णपणे खराब केले पाहिजे आणि कोणतेही प्रवर्धन उत्पादन तयार केले जाऊ शकत नाही.
4.एक्सोजेनस न्यूक्लीज क्रियाकलाप नाही
सूचना
| घटक | व्हॉल्यूम (μL) | अंतिम एकाग्रता |
| 10 × पीसीआर बफर (dNTP फ्री, Mg²+फुकट) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (dTTP बदला) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 मिमी |
| 5 U/μL Taq | ०.२५ | 1.25 U |
| 5 U/μL UNG | ०.२५ (०.१-०.५) | 0.25 U (0.1-0.5) |
| 25 × प्राइमर मिक्सa | 2 | 1× |
| साचा | - | 1μg/प्रतिक्रिया |
| ddH₂O | 50 पर्यंत | - |
टीप: a: qPCR/qRT-PCR साठी वापरल्यास, फ्लोरोसेंट प्रोब प्रतिक्रिया प्रणालीमध्ये जोडले जावे.सहसा, 0.2 μM ची अंतिम प्राइमर एकाग्रता चांगले परिणाम देऊ शकते;जेव्हा प्रतिक्रिया कार्यक्षमता खराब असते, तेव्हा प्राइमर एकाग्रता 0.2-1 μM च्या श्रेणीमध्ये समायोजित केली जाऊ शकते.सहसा, प्रोब एकाग्रता 0.1-0.3 μM च्या श्रेणीमध्ये ऑप्टिमाइझ केली जाते.प्राइमर आणि प्रोबचे सर्वोत्तम संयोजन शोधण्यासाठी एकाग्रता ग्रेडियंट प्रयोग केले जाऊ शकतात.
नोट्स
1.UNG एंझाइमचा वापर PCR ॲम्प्लीफिकेशन रिॲक्शनपूर्वी रिॲक्शन सिस्टीममधून दूषित dUTP ॲम्प्लिफिकेशन उत्पादने काढून टाकण्यासाठी केला जाऊ शकतो, त्यानंतर उत्पादनाच्या दूषिततेमुळे चुकीचे-सकारात्मक परिणाम टाळण्यासाठी.
2.दूषितता विरोधी PCR प्रतिक्रिया मध्ये वापरल्या जाणाऱ्या UNG एंझाइमसाठी इष्टतम तापमान सामान्यतः 2 मिनिटांसाठी 50℃ असते;निष्क्रियता स्थिती 5 मिनिटांसाठी 95℃ आहे.
3.वारंवार फ्रीझ-थॉ टाळा आणि तापमानातील मोठ्या चढउतारांना सामोरे जाऊ नका.
4.वाढवल्या जाणाऱ्या भिन्न जनुकांमध्ये dUTP ची भिन्न उपयोग कार्यक्षमता आणि UNG एंझाइमची संवेदनशीलता असते, म्हणून, UNG प्रणालीच्या वापरामुळे शोध संवेदनशीलता कमी होत असल्यास, प्रतिक्रिया प्रणाली समायोजित आणि ऑप्टिमाइझ केली पाहिजे, जर आपल्याला तांत्रिक समर्थनाची आवश्यकता असेल तर कृपया संपर्क साधा आमची कंपनी.
