5×Neoscript फास्ट RT-qPCR प्रीमिक्स प्लस-UNG
मांजर क्रमांक: HCB5142A
निओस्क्रिप्ट फास्ट आरटी प्रीमिक्स-यूएनजी (प्रोब क्यूआरटी-पीसीआर) हे अत्यंत स्थिर वन-ट्यूब प्रोब-आधारित मिश्रण आहे जे वन-स्टेप रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन आणि क्वांटिटेटिव्ह पीसीआर (क्यूआरटी-पीसीआर) साठी योग्य आहे.हे प्राइमर्स आणि प्रोबच्या प्री-मिक्सिंगला सपोर्ट करते आणि कमी तापमानात दीर्घकाळ साठवल्यानंतर स्थिर राहते.चाचणी केली जाणारी नमुना अतिरिक्त ट्यूब ओपनिंग/पाइपेटिंग ऑपरेशनशिवाय वापरताना थेट जोडली जाऊ शकते.हे उत्पादन घटक प्रदान करते, उदा. हॉट-स्टार्ट डीएनए पॉलिमरेज, एम-एमएलव्ही, हीट-लेबाइल यूरासिल डीएनए ग्लायकोसिलेस (TS-UNG), RNase इनहिबिटर, MgCl2, dNTPs (dTTP ऐवजी dUTP सह), आणि स्टॅबिलायझर्स.अनुवांशिकदृष्ट्या सुधारित जलद प्रवर्धन रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेस आणि डीएनए पॉलिमरेझसह, 20-40 मिनिटांत पीसीआर प्रवर्धन पूर्ण करणे शक्य आहे.हे अभिकर्मक क्यूपीसीआरसाठी अँटी-इनहिबिटरी ॲम्प्लीफिकेशन एन्झाइम आणि यूएनजी एंझाइमच्या मिश्रित एंझाइमसह विशेष बफर वापरते.त्यामुळे, ते लक्ष्य जनुकांचे चांगले प्रवर्धन मिळवू शकते आणि पीसीआर अवशिष्ट आणि एरोसोल प्रदूषणामुळे होणारे खोटे प्रवर्धन रोखू शकते.हे अभिकर्मक अप्लाइड बायोसिस्टम्स, एपेनडॉर्फ, बायो-रॅड आणि रोशे सारख्या उत्पादकांकडील बहुतेक फ्लोरोसेन्स परिमाणात्मक पीसीआर साधनांशी सुसंगत आहे.
घटक
१.25×Neoscript फास्ट RTase/UNG मिक्स
2.5×नियोस्क्रिप्ट फास्ट आरटी प्रीमिक्स बफर (dUTP)
स्टोरेज अटी
सर्व घटक दीर्घकालीन स्टोरेजसाठी -20℃ आणि 3 महिन्यांपर्यंत 4℃ ठेवावे.कृपया वितळल्यानंतर पूर्णपणे मिसळा आणि वापरण्यापूर्वी सेंट्रीफ्यूज करा.वारंवार फ्रीझ-थॉ टाळा.
qRT-PCR प्रतिक्रिया प्रणालीची तयारी
| घटक | 25μLप्रणाली | 50μLप्रणाली | अंतिम एकाग्रता |
| 5×नियोस्क्रिप्ट फास्ट आरटी प्रीमिक्स बफर (dUTP) | 5μL | 10μL | 1× |
| 25×Neoscript फास्ट RTase/UNG मिक्स | 1μL | 2μL | 1× |
| 25×प्राइमर-प्रोब मिक्सa | 1μL | 2μL | 1× |
| टेम्पलेट आरएनएb | - | - | - |
| ddH2O | 25μL पर्यंत | 50μL पर्यंत | - |
1) a. प्राइमरची अंतिम एकाग्रता सहसा 0.2μM असते.चांगल्या परिणामांसाठी, प्राइमर एकाग्रता 0.2-1μM च्या श्रेणीमध्ये ऑप्टिमाइझ केली जाऊ शकते.साधारणपणे, प्रोब एकाग्रता 0.1-0.3μM च्या श्रेणीमध्ये ऑप्टिमाइझ केली जाऊ शकते.
2) b. वेगवान PCR प्रक्रिया वापरताना, प्राइमर्स आणि प्रोब्सची एकाग्रता वाढवल्याने चांगले प्रवर्धन परिणाम मिळू शकतात आणि त्यांचे गुणोत्तर त्यानुसार अनुकूल केले पाहिजे.
3) विविध प्रकारच्या नमुन्यांमध्ये भिन्न प्रकार आणि अवरोधक आणि लक्ष्य जनुकाची कॉपी संख्या असते.नमुन्याचे प्रमाण वास्तविक स्थितीनुसार विचारात घेतले पाहिजे.आवश्यक असल्यास, न्युक्लीज-मुक्त पाणी किंवा TE बफरसह नमुना सौम्य करा.
प्रतिक्रिया Cओंडिशन्स
| नियमित पीसीआर प्रक्रिया | वेगवान पीसीआर प्रक्रिया | ||||||
| कार्यपद्धती | टेंप. | वेळ | सायकल | कार्यपद्धती | टेंप. | वेळ | सायकल |
| उलट प्रतिलेखन | 50℃ | 10-20 मिनिटे | 1 | उलट प्रतिलेखन | 50℃ | ५ मिनिटे | 1 |
| पॉलिमरेज सक्रियकरण | 95℃ | 1-5 मिनिटे | 1 | पॉलिमरेज सक्रियकरण | 95℃ | 30 चे दशक | 1 |
| विकृतीकरण | 95℃ | 10-20 | 40-50 | विकृतीकरण | 95℃ | 1-3 से | 40-50 |
| एनीलिंग आणि विस्तार | 56-64℃ | 20-60 चे दशक | एनीलिंग आणि विस्तार | 56-64℃ | 3-20s | ||
गुणवत्ता नियंत्रण
1.फंक्शन डिटेक्शन: qPCR ची संवेदनशीलता, विशिष्टता आणि पुनरावृत्तीक्षमता.
2.एक्सोजेनस न्यूक्लीज क्रियाकलाप नाही: एक्सोजेनस एंडोन्यूक्लीज आणि एक्सोन्यूक्लीज प्रदूषण नाही.
नोट्स
१.वेगवान डीएनए पॉलिमरेझचा प्रवर्धन दर 1kb/10s पेक्षा कमी नाही.वेगवेगळ्या पीसीआर उपकरणांमध्ये हीटिंग आणि कूलिंग वेग, तापमान नियंत्रण मोड आणि थर्मल चालकता भिन्न असते आणि अशा प्रकारे तुमच्या प्राइमर/प्रोब एकाग्रतेचे ऑप्टिमायझेशन आणि तुमच्या विशिष्ट वेगवान पीसीआर इन्स्ट्रुमेंटच्या संयोजनात चालण्याची पद्धत आवश्यक आहे.
2.हे उत्पादन मोठ्या प्रमाणात लागू होते आणि ते उच्च-संवेदनशीलता आण्विक निदानासाठी योग्य आहे.कमी ॲनिलिंग तापमान असलेल्या प्राइमर्ससाठी किंवा 200 bp पेक्षा जास्त लांब तुकड्यांच्या वाढीसाठी तीन-चरण पीसीआर पद्धतीची शिफारस केली जाते.
3.भिन्न अँप्लिकॉन्समध्ये dUTP ची भिन्न वापर कार्यक्षमता आणि UNG ची भिन्न संवेदनशीलता असल्याने, UNG प्रणाली वापरताना शोध संवेदनशीलता कमी झाल्यास अभिकर्मक ऑप्टिमाइझ केले जावे.कृपया आवश्यक असल्यास तांत्रिक समर्थनासाठी आमच्याशी संपर्क साधा.
4.कॅरीओव्हर पीसीआर उत्पादनांचे प्रवर्धन टाळण्यासाठी, प्रवर्धनासाठी समर्पित प्रायोगिक क्षेत्र आणि विंदुक आवश्यक आहे.हातमोजे वापरून चालवा आणि वारंवार बदला आणि प्रवर्धनानंतर पीसीआर ट्यूब उघडू नका.
