प्रोटीनेज के एनजीएस (पावडर)
मांजर क्रमांक: HC4507A
NGS Protease K हे उच्च एंझाइम क्रियाकलाप आणि विस्तृत सब्सट्रेट विशिष्टतेसह एक स्थिर सेरीन प्रोटीज आहे. एंझाइम प्राधान्याने हायड्रोफोबिक अमीनो ॲसिड, सल्फरयुक्त अमीनो ॲसिड आणि सुगंधी अमीनो ॲसिडच्या सी-टर्मिनलला लागून असलेल्या एस्टर बॉण्ड्स आणि पेप्टाइड बॉन्ड्सचे विघटन करते.तर, हे प्रथिनांना लहान पेप्टाइड्समध्ये कमी करण्यासाठी वापरले जाते.एनजीएस प्रोटीज के हे एएसपीसह एक सामान्य सेरीन प्रोटीज आहे39-त्याचा69-सेर224उत्प्रेरक ट्रायड जे सेरीन प्रोटीजसाठी अद्वितीय आहे आणि उत्प्रेरक केंद्र टो Ca ने वेढलेले आहे2+स्थिरीकरणासाठी साइट्स बंधनकारक, परिस्थितीच्या विस्तृत श्रेणीत उच्च एंजाइम क्रियाकलाप राखणे.
तपशील
| देखावा | पांढरा ते ऑफ-व्हाइट अमोर्फस पावडर, लायोफिलाइज्ड |
| विशिष्ट क्रियाकलाप | ≥40U/mg घन |
| DNase | काहीही आढळले नाही |
| RNase | काहीही आढळले नाही |
| बायोबर्डन | ≤50CFU/g घन |
| न्यूक्लिक ॲसिडचे अवशेष | <5pg/mg घन |
गुणधर्म
| स्त्रोत | ट्रिटिराचियम अल्बम |
| EC क्रमांक | ३.४.२१.६४(ट्रिटिराचियम अल्बममधील रीकॉम्बीनंट) |
| आण्विक वजन | 29kDa (SDS-PAGE) |
| आयसोइलेक्ट्रिक पॉइंट | 7.81 Fig.1 |
| इष्टतम पीएच | 7.0-12.0 (सर्व उच्च क्रियाकलाप करतात) Fig.2 |
| इष्टतम तापमान | 65℃ अंजीर.3 |
| पीएच स्थिरता | pH 4.5-12.5 (25℃,16h) Fig.4 |
| थर्मल स्थिरता | 50℃ खाली (pH 8.0, 30min) Fig.5 |
| स्टोरेज स्थिरता | 12 महिन्यांसाठी 25℃ तापमानात साठवलेले चित्र.6 |
| सक्रिय करणारे | एसडीएस, युरिया |
| अवरोधक | डायसोप्रोपिल फ्लोरोफॉस्फेट;बेंझिलसल्फोनिल फ्लोराइड |
स्टोरेज अटी
लायफिलाइज्ड पावडर -25~-15 ℃ वर प्रकाशापासून बराच काळ दूर ठेवा;विरघळल्यानंतर, प्रकाशापासून दूर 2-8 ℃ वर अल्पकालीन स्टोरेजसाठी योग्य व्हॉल्यूममध्ये किंवा प्रकाशापासून दूर -25~-15 ℃ वर दीर्घकालीन स्टोरेज.
सावधगिरी
वापरताना किंवा वजन करताना संरक्षक हातमोजे आणि गॉगल घाला आणि वापरल्यानंतर हवेशीर ठेवा.या उत्पादनामुळे त्वचेची एलर्जी होऊ शकते आणि डोळ्यांची गंभीर जळजळ होऊ शकते.श्वास घेतल्यास, यामुळे ऍलर्जी किंवा दम्याची लक्षणे किंवा डिस्पनिया होऊ शकतो.श्वसनाचा त्रास होऊ शकतो.
युनिट व्याख्या
NGS Protease K चे एक युनिट मानक निर्धारण परिस्थितीनुसार 1 μmol L-tyrosine मध्ये केसिनचे हायड्रोलायझ करण्यासाठी आवश्यक एन्झाइमची मात्रा म्हणून परिभाषित केले जाते.
अभिकर्मक तयारी
| अभिकर्मक | निर्माता | कॅटलॉग |
| केसीन तांत्रिकबोवाइन दुधापासून | सिग्मा अल्ड्रिच | C7078 |
| NaOH | सिनोफार्म केमिकलअभिकर्मक कं, लि. | 10019762 |
| NaH2PO4· २ एच2O | सिनोफार्म केमिकलअभिकर्मक कं, लि. | 20040718 |
| Na2HPO4 | सिनोफार्म केमिकलअभिकर्मक कं, लि. | 20040618 |
| ट्रायक्लोरोएसेटिक ऍसिड | सिनोफार्म केमिकलअभिकर्मक कं, लि. | ८०१३२६१८ |
| सोडियम एसीटेट | सिनोफार्म केमिकलअभिकर्मक कं, लि. | 10018818 |
| ऍसिटिक ऍसिड | सिनोफार्म केमिकलअभिकर्मक कं, लि. | 10000218 |
| एचसीएल | सिनोफार्म केमिकलअभिकर्मक कं, लि. | 10011018 |
| सोडियम कोर्बोनेट | सिनोफार्म केमिकलअभिकर्मक कं, लि. | 10019260 |
| फॉलिन-फिनॉल | सांगोन बायोटेक (शांघाय)सहकारी, मर्यादित. | A500467-0100 |
| एल-टायरोसिन | सिग्मा | ९३८२९ |
अभिकर्मक I:
सब्सट्रेट: बोवाइन मिल्क सोल्यूशनमधून 1% केसीन: 0.1 एम सोडियम फॉस्फेट सोल्यूशन, पीएच 8.0 च्या 50 मिली मध्ये 1 ग्रॅम बोवाइन मिल्क केसीन विरघळवा, 65-70 डिग्री सेल्सिअस तापमानात 15 मिनिटांसाठी वॉटर बाथमध्ये गरम करा, ढवळून विरघळवा, पाण्याने थंड करा, समायोजित करा. सोडियम हायड्रॉक्साईड ते pH 8.0, आणि 100ml मध्ये पातळ करा.
अभिकर्मक II:
TCA सोल्यूशन: 0.1M ट्रायक्लोरोएसिटिक ऍसिड, 0.2M सोडियम ऍसिटेट आणि 0.3M ऍसिटिक ऍसिड (वजन 1.64g ट्रायक्लोरोएसिटिक ऍसिड + 1.64g सोडियम ऍसिटेट + 1.724mL ऍसिटिक ऍसिड क्रमशः, 50mL डिआयोनाइज्ड पाणी घालावे, pH30 बरोबर HC4lute समायोजित करा. 100 मिली).
अभिकर्मक III:
0.4m सोडियम कार्बोनेट द्रावण (4.24g निर्जल सोडियम कार्बोनेटचे वजन आणि 100mL पाण्यात विरघळते)
अभिकर्मक IV:
फॉलिन फिनॉल अभिकर्मक: डीआयोनाइज्ड पाण्याने 5 वेळा पातळ करा.
अभिकर्मक V:
सजीवांच्या शरीरात निर्मार्ण होणारे द्रव्य: 0.1 M सोडियम फॉस्फेट द्रावण, pH 8.0.
अभिकर्मक VI:
L-टायरोसिन मानक द्रावण:0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml L-टायरोसिन 0.2M HCl सह विरघळलेले.
कार्यपद्धती
1. UV-Vis स्पेक्ट्रोफोटोमीटर चालू करा आणि फोटोमेट्रिक मापन निवडा.
2. तरंगलांबी 660nm म्हणून सेट करा.
3. वॉटर बाथ चालू करा, तापमान 37 डिग्री सेल्सियस वर सेट करा, तापमान 3-5 मिनिटांसाठी अपरिवर्तित असल्याची खात्री करा.
4. 2mL सेंट्रीफ्यूज ट्यूबमध्ये 0.5mL सब्सट्रेट 37℃ वॉटर बाथमध्ये 10 मिनिटांसाठी प्रीहीट करा.
5. प्रीहेटेड सेंट्रीफ्यूज ट्यूबमध्ये 0.5mL पातळ केलेले एंझाइम द्रावण 10 मिनिटे काढा.एंजाइम diluent रिक्त गट म्हणून सेट करा.
6. प्रतिक्रिया झाल्यानंतर लगेच 1.0 mL TCA अभिकर्मक जोडा.चांगले मिसळा आणि 30 मिनिटे वॉटर बाथमध्ये उबवा.
7. सेंट्रीफ्यूगेट प्रतिक्रिया समाधान.
8. निर्दिष्ट क्रमाने खालील घटक जोडा.
| अभिकर्मक | खंड |
| वरवरचा | 0.5 मिली |
| 0.4M सोडियम कार्बोनेट | 2.5 मिली |
| फॉलिन फिनॉल अभिकर्मक | 0.5 मिली |
9. 37 डिग्री तापमानात 30 मिनिटांसाठी वॉटर बाथमध्ये उबवण्यापूर्वी चांगले मिसळा.
10. OD६६०OD म्हणून निर्धारित केले होते1;रिक्त नियंत्रण गट: OD निश्चित करण्यासाठी एंजाइम द्रावण बदलण्यासाठी एन्झाइम डायल्युएंट वापरला जातो६६०OD म्हणून2, ΔOD=OD1-OD2.
11. L-टायरोसिन मानक वक्र: 0.5mL भिन्न एकाग्रता L-टायरोसिन द्रावण, 2.5mL 0.4M सोडियम कार्बोनेट, 5mL सेंट्रीफ्यूज ट्यूबमध्ये 0.5mL फॉलिन फिनॉल अभिकर्मक, 30 मिनिटांसाठी 37℃ मध्ये उष्मायन, OD शोधणे६६०एल-टायरोसिनच्या वेगवेगळ्या एकाग्रतेसाठी, नंतर मानक वक्र Y=kX+b प्राप्त केले, जेथे Y हा L-टायरोसिन एकाग्रता आहे, X हा OD आहे600.
गणना
2: प्रतिक्रिया समाधानाची एकूण मात्रा (mL)
0.5: एंजाइम द्रावणाचे प्रमाण (mL)
0.5: क्रोमोजेनिक निर्धारण (mL) मध्ये वापरलेली प्रतिक्रिया द्रव मात्रा
10: प्रतिक्रिया वेळ (मि.)
Df: सौम्यता अनेक
C: एन्झाइम एकाग्रता (mg/mL)
आकडे
Fig.1 DNA अवशेष
| नमुना | Ave C4 | न्यूक्लिक ॲसिड पुनर्प्राप्ती(pg/mg) | पुनर्प्राप्ती(%) | एकूण न्यूक्लिक ऍसिड ( pg/mg) |
| PRK | २४.६६ | २.२३ | ८३% | २.६८७ |
| PRK+STD2 | १८.७२३ | १२६.७२८ | - | - |
| STD1 | १२.९५५ |
- |
- |
- |
| STD2 | 16 | |||
| STD3 | १९.१२५ | |||
| STD4 | २३.१३५ | |||
| STD5 | २६.६२५ | |||
| RNA-मुक्त H2O | अनिर्धारित | - | - | - |
Fig.2 इष्टतम pH
Fig.3 इष्टतम तापमान
Fig.4 pH स्थिरता
Fig.5 थर्मल स्थिरता
Fig.6 25℃ वर स्टोरेज स्थिरता
