UDG/UNG एन्झाइम्स
UDG(uracil DNA glycosylase) ssDNA आणि dsDNA मधील uracil बेस आणि शुगर-फॉस्फेट बॅकबोनमधील N-glycosidic लिंकचे हायड्रोलिसिस उत्प्रेरित करू शकते.हे एरोसोल प्रदूषण सहजपणे नियंत्रित करू शकते आणि PCR, qPCR, RT-qPCR आणि LAMP सारख्या सामान्य आण्विक जीवशास्त्र प्रणालींसाठी योग्य आहे.
तपशील
| अभिव्यक्ती होस्ट | रिकॉम्बिनंट ई. कोलिविथ युरेसिल डीएनए ग्लायकोसिलेज जनुक |
| आण्विक वजन | 24. 8kDa |
| पवित्रता | ≥95% (SDS-PAGE) |
| उष्णता निष्क्रियता | 95℃, 5~10 मि |
| युनिट व्याख्या | एक युनिट (U) हे 25℃ वर 30 मिनिटांत l μg dU-युक्त dsDNA चे हायड्रोलिसिस उत्प्रेरित करण्यासाठी आवश्यक एंजाइमचे प्रमाण म्हणून परिभाषित केले जाते. |
स्टोरेज
उत्पादन दोन वर्षांसाठी -25℃~-15°C वर साठवले पाहिजे.
सूचना
1.खालील प्रणालीनुसार पीसीआर प्रतिक्रिया मिश्रण तयार करणे
| घटक | व्हॉल्यूम (μL) | अंतिम एकाग्रता |
| 10×PCR बफर (Mg²+प्लस) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1.5 mmol/L |
| dUTP(10 mmol/L) | 3 | 0.6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10mmol/लीच) | 1 | 0.2 mmol/लीच |
| टेम्पलेट डीएनए | X | - |
| प्राइमर1 (10μmol/L) | 2 | 0.4 μmol/L |
| प्राइमर 2 (10μmol/L) | 2 | 0.4 μmol/L |
| Taq DNA पॉलिमरेज (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
| युरासिल डीएनए ग्लायकोसिलेस (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | 50 पर्यंत | - |
टीप: प्रायोगिक आवश्यकतांनुसार, dUTP ची अंतिम एकाग्रता 0.2-0.6 mmol/L दरम्यान समायोजित केली जाऊ शकते आणि 0.2 mmol/L dTTP निवडकपणे जोडली जाऊ शकते.
2.प्रवर्धन प्रक्रिया
| सायकल पायरी | तापमान | वेळ | सायकल |
| dU-युक्त टेम्पलेट डिग्रेडेशन | 25℃ | 10 मिनिटे | 1 |
| UDG सक्रियकरण, टेम्पलेट प्रारंभिक विकृतीकरण | 95℃ | 5~10 मिनिटे | 1 |
| विकृतीकरण | 95℃ | 10 से |
30-35 |
| एनीलिंग | 60℃ | 20 से | |
| विस्तार | 72℃ | 30से/केबी | |
| अंतिम विस्तार | 72℃ | ५ मि | 1 |
टीप: 25°C वर प्रतिक्रिया वेळ प्रायोगिक आवश्यकतांनुसार 5-10 मिनिटांत समायोजित केली जाऊ शकते.
नोट्स
1.UDG बहुतेक PCR प्रतिक्रिया बफरमध्ये सक्रिय आहे.
2.एन्झाईम्स बर्फाच्या पेटीत किंवा बर्फाच्या आंघोळीत साठवून ठेवल्या पाहिजेत आणि वापरल्यानंतर लगेच -20 डिग्री सेल्सिअस तापमानात साठवल्या पाहिजेत.
3.तुमचे आरोग्य आणि सुरक्षितता सुनिश्चित करण्यासाठी कृपया आवश्यक PPE, जसे की लॅब कोट आणि हातमोजे घाला!
