प्रोटीनेज के (द्रव)
मांजर क्रमांक: HC4502A
प्रोटीनेज के हे ब्रॉड सब्सट्रेट विशिष्टतेसह स्थिर सेरीन प्रोटीज आहे.हे डिटर्जंटच्या उपस्थितीतही मूळ स्थितीत अनेक प्रथिने खराब करते.क्रिस्टल आणि आण्विक संरचना अभ्यासातील पुराव्यांवरून असे सूचित होते की एंझाइम सक्रिय साइट उत्प्रेरक ट्रायडसह सबटिलिसिन कुटुंबातील आहे (Asp39-त्याचा69- सेर224).क्लीव्हेजचे मुख्य ठिकाण म्हणजे अवरोधित अल्फा अमिनो गटांसह ॲलिफॅटिक आणि सुगंधी अमीनो आम्लांच्या कार्बोक्सिल गटाला लागून असलेले पेप्टाइड बंध.हे सामान्यतः त्याच्या व्यापकतेसाठी वापरले जातेविशिष्टता
तपशील
| देखावा | रंगहीन ते हलका तपकिरी द्रव |
| क्रियाकलाप | ≥800 U/ml |
| प्रथिने एकाग्रता | ≥20 mg/ml |
| DNase | काहीही आढळले नाही |
| RNase | काहीही आढळले नाही |
स्टोरेज अटी
2-8 डिग्री सेल्सियस तापमानात साठवा.
गुणधर्म
| EC क्रमांक | ३.४.२१.६४ (आरट्रिटिरॅचियम अल्बममधील एकसंध) |
| आण्विक वजन | 29 kDa (SDS-PAGE) |
| आयसोइलेक्ट्रिक पॉइंट | ७.८१ |
| इष्टतम पीएच | 7.0-12.0 Fig.1 |
| इष्टतम तापमान | 65 ℃ Fig.2 |
| पीएच स्थिरता | pH 4.5-12.5 (25℃, 16 h) Fig.3 |
| थर्मल स्थिरता | 50℃ खाली (pH 8.0, 30 मिनिटे) Fig.4 |
| सक्रिय करणारे | एसडीएस, युरिया |
| अवरोधक | डायसोप्रोपिल फ्लोरोफॉस्फेट;फेनिलमेथाइलसल्फोनिल फ्लोराइड |
अर्ज
1. जेनेटिक डायग्नोस्टिक किट
2. आरएनए आणि डीएनए निष्कर्षण किट
3. ऊतकांमधून नॉन-प्रोटीन घटक काढणे, प्रथिने अशुद्धी कमी करणे, जसे की डीएनए लसी आणि हेपरिन तयार करणे
4. स्पंदित इलेक्ट्रोफोरेसीसद्वारे गुणसूत्र डीएनए तयार करणे
5. वेस्टर्न ब्लॉट
6. एंझाइमॅटिक ग्लायकोसिलेटेड अल्ब्युमिन अभिकर्मक इन विट्रो डायग्नोसिस
सावधगिरी
वापरताना किंवा वजन करताना संरक्षक हातमोजे आणि गॉगल घाला आणि वापरल्यानंतर हवेशीर ठेवा.या उत्पादनामुळे त्वचेची एलर्जी होऊ शकते आणि डोळ्यांची गंभीर जळजळ होऊ शकते.श्वास घेतल्यास, यामुळे ऍलर्जी किंवा दम्याची लक्षणे किंवा डिस्पनिया होऊ शकतो.श्वसनाचा त्रास होऊ शकतो.
परख
युनिट व्याख्या
खालील परिस्थितीत 1 μmol टायरोसिन प्रति मिनिट तयार करण्यासाठी केसिनचे हायड्रोलायझ करण्यासाठी आवश्यक एंजाइमचे प्रमाण म्हणून एक युनिट (U) परिभाषित केले जाते.
अभिकर्मक तयारी
अभिकर्मक I: 1g दुधाचे केसीन 0.1M सोडियम फॉस्फेट द्रावण (pH 8.0) च्या 50ml मध्ये विरघळले गेले, 15 मिनिटे 65-70 ℃ पाण्यात उबवले गेले, ढवळले आणि विरघळले, पाण्याने थंड केले, सोडियम हायड्रॉक्साईडने pH8.0 मध्ये समायोजित केले आणि निश्चित केले. व्हॉल्यूम 100 मिली.
अभिकर्मक II: TCA सोल्यूशन: 0.1M ट्रायक्लोरोएसिटिक ऍसिड, 0.2M सोडियम ऍसिटेट, 0.3M ऍसिटिक ऍसिड.
अभिकर्मक III: 0.4M Na2CO3उपाय.
अभिकर्मक IV: फोरिंट अभिकर्मक 5 वेळा शुद्ध पाण्याने पातळ केले जाते.
अभिकर्मक V: एन्झाइम डायल्युएंट: 0.1M सोडियम फॉस्फेट द्रावण (पीएच 8.0).
अभिकर्मक VI: टायरोसिन द्रावण:0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml टायरोसिन 0.2M HCl सह विरघळले.
कार्यपद्धती
1. 0.5 मिली अभिकर्मक I चे तापमान 37 डिग्री सेल्सियस पर्यंत गरम केले जाते, त्यात 0.5 मिली एंजाइम द्रावण घाला, चांगले मिसळा आणि 37 डिग्री सेल्सियस वर 10 मिनिटे उबवा.
2. प्रतिक्रिया थांबवण्यासाठी 1 मिली अभिकर्मक II घाला, चांगले मिसळा आणि 30 मिनिटे उष्मायन सुरू ठेवा.
3. सेंट्रीफ्यूगेट प्रतिक्रिया समाधान.
4. 0.5ml supernatant घ्या, 2.5ml अभिकर्मक III, 0.5ml अभिकर्मक IV जोडा, चांगले मिसळा आणि 37℃ वर 30 मिनिटे उबवा.
5. OD६६०OD म्हणून निर्धारित केले होते1;रिक्त नियंत्रण गट: 0.5ml अभिकर्मक V चा वापर OD निश्चित करण्यासाठी एंजाइम द्रावण बदलण्यासाठी केला जातो६६०OD म्हणून2, ΔOD=OD1-OD2.
6. L-टायरोसिन मानक वक्र: 0.5mL भिन्न एकाग्रता L-टायरोसिन द्रावण, 2.5mL अभिकर्मक III, 0.5mL अभिकर्मक IV 5mL सेंट्रीफ्यूज ट्यूबमध्ये, 30mins साठी 37℃ मध्ये उबवणे, OD साठी शोधणे६६०एल-टायरोसिनच्या वेगवेगळ्या एकाग्रतेसाठी, नंतर मानक वक्र Y=kX+b प्राप्त केले, जेथे Y हा L-टायरोसिन एकाग्रता आहे, X हा OD आहे600.
गणना
2: प्रतिक्रिया समाधानाची एकूण मात्रा (mL)
0.5: एंजाइम द्रावणाचे प्रमाण (mL)
0.5: क्रोमोजेनिक निर्धारण (mL) मध्ये वापरलेली प्रतिक्रिया द्रव मात्रा
10: प्रतिक्रिया वेळ (मि.)
Df: सौम्यता अनेक
C: एन्झाइम एकाग्रता (mg/mL)
संदर्भ
1. Wieger U & Hilz H. FEBS Lett.(1972);२३:७७.
2. Wieger U & Hilz H. बायोकेम.बायोफिज.रा.कम्युन.(1971);४४:५१३.
3. हिल्झ, एच.इत्यादी.,युरो.जे. बायोकेम.(1975);५६:१०३–१०८.
4. सॅमब्रुक जेet अल., आण्विक क्लोनिंग: अ लॅबोरेटरी मॅन्युअल, दुसरी आवृत्ती, कोल्ड स्प्रिंग हार्बर लॅबोरेटरी प्रेस, कोल्ड स्प्रिंग हार्बर (1989).
आकडे
अंजीर. 1 इष्टतम pH
100 मिमी बफर सोल्यूशन: पीएच 6.0-8.0, ना-फॉस्फेट;pH8.0- 9.0, Tris-HCl;pH9.0-12.5, Glycine-NaOH. एन्झाइम एकाग्रता: 1mg/mL
अंजीर 2 इष्टतम तापमान
20mM के-फॉस्फेट बफर pH 8.0 मध्ये प्रतिक्रिया.एंजाइम एकाग्रता: 1mg/mL
अंजीर 3 pH स्थिरता
50mM बफर सोल्यूशनसह 25℃,16 h-उपचार: pH 4.5-5.5, Acetate;पीएच 6.0-8.0, ना-फॉस्फेट;pH 8.0-9.0, Tris-एचसीएलpH 9.0-12.5, Glycine-NaOH.एंजाइम एकाग्रता: 1mg/mL
अंजीर 4 थर्मल स्थिरता
50mm Tris-HCl बफर, pH 8.0 सह 30 मिनिट-उपचार.एंजाइम एकाग्रता: 1mg/mL
अंजीर 5 स्टोरेज स्थिरty at 25℃
