युनिव्हर्सल SYBR GREEN qPCR प्रीमिक्स (ब्लू)

मांजर क्रमांक: HCB5041B

युनिव्हर्सल ब्लू क्यूपीसीआर मास्टर मिक्स (डाय बेस्ड) हे 2×वास्तविक-वेळ परिमाणात्मक पीसीआर ॲम्प्लीफिकेशनसाठी प्री-सोल्यूशन आहे जे उच्च संवेदनशीलता आणि विशिष्टतेद्वारे वैशिष्ट्यीकृत आहे, रंगात निळा आहे आणि नमुना जोडणी ट्रेसिंगचा प्रभाव आहे.मुख्य घटक Taq DNA पॉलिमरेझ नमुना तयार करताना प्राइमर ॲनिलिंगमुळे गैर-विशिष्ट प्रवर्धन प्रभावीपणे रोखण्यासाठी अँटीबॉडी हॉट स्टार्टचा वापर करते.त्याच वेळी, सूत्र पीसीआर प्रतिक्रियेची प्रवर्धन कार्यक्षमता सुधारण्यासाठी आणि विविध जीसी सामग्रीसह (30 ~ 70%) जनुकांच्या प्रवर्धनास समान करण्यासाठी प्रोत्साहन देणारे घटक जोडते, जेणेकरून परिमाणवाचक पीसीआर विस्तृत परिमाणात एक चांगला रेखीय संबंध प्राप्त करू शकेल. प्रदेशया उत्पादनामध्ये विशेष ROX पॅसिव्ह रेफरन्स डाई आहे, जे बहुतेक qPCR साधनांना लागू आहे.वेगवेगळ्या साधनांवर आरओएक्सची एकाग्रता समायोजित करणे आवश्यक नाही.प्रवर्धनासाठी प्रतिक्रिया प्रणाली तयार करण्यासाठी केवळ प्राइमर्स आणि टेम्पलेट्स जोडणे आवश्यक आहे.

घटक

युनिव्हर्सल ब्लू qPCR मास्टर मिक्स

स्टोरेज परिस्थिती

उत्पादन बर्फ पॅकसह पाठवले जाते आणि 18 महिन्यांसाठी -25℃~-15℃ येथे साठवले जाऊ शकते.प्रतिक्रिया प्रणाली संचयित करताना किंवा तयार करताना तीव्र प्रकाश विकिरण टाळणे आवश्यक आहे.

तपशील

सूचना

1. प्रतिक्रिया प्रणाली

[टीप]: जोरदार थरथरण्यापासून जास्त बुडबुडे टाळण्यासाठी वापरण्यापूर्वी पूर्णपणे मिसळा.

अ) प्राइमर एकाग्रता: अंतिम प्राइमर एकाग्रता 0.2μmol/L आहे, आणि 0.1 आणि 1.0μmol/L दरम्यान देखील समायोजित केले जाऊ शकते.

b) टेम्पलेट एकाग्रता: जर टेम्पलेटमध्ये cDNA स्टॉक सोल्यूशन अविचलित असेल, तर वापरलेला आवाज qPCR प्रतिक्रियेच्या एकूण व्हॉल्यूमच्या 1/10 पेक्षा जास्त नसावा.

c) टेम्पलेट सौम्य करणे: सीडीएनए स्टॉक सोल्यूशन 5-10 वेळा पातळ करण्याची शिफारस केली जाते.जेव्हा ॲम्प्लीफिकेशनद्वारे प्राप्त केलेले Ct मूल्य 20-30 चक्र असते तेव्हा जोडलेले टेम्पलेटचे इष्टतम प्रमाण चांगले असते.

ड) प्रतिक्रिया प्रणाली: लक्ष्य जनुक प्रवर्धनाची परिणामकारकता आणि पुनरावृत्ती सुनिश्चित करण्यासाठी 20μL किंवा 50μL वापरण्याची शिफारस केली जाते.

e) प्रणालीची तयारी: कृपया सुपर क्लीन बेंचमध्ये तयारी करा आणि न्यूक्लीज अवशेषांशिवाय टिपा आणि प्रतिक्रिया ट्यूब वापरा;फिल्टर काडतुसेसह टिपा वापरण्याची शिफारस केली जाते.क्रॉस दूषित होणे आणि एरोसोल दूषित होणे टाळा.

2.प्रतिक्रिया कार्यक्रम

मानक कार्यक्रम

जलद कार्यक्रम

[टीप]: जलद कार्यक्रम बहुसंख्य जनुकांसाठी योग्य आहे आणि वैयक्तिक जटिल दुय्यम संरचनेच्या जनुकांसाठी मानक प्रोग्राम वापरून पाहिले जाऊ शकतात.

अ) एनीलिंग तापमान आणि वेळ: कृपया प्राइमर आणि लक्ष्य जनुकाच्या लांबीनुसार समायोजित करा.

b) फ्लूरोसेन्स सिग्नल संपादन (★): कृपया इन्स्ट्रुमेंटच्या वापराच्या सूचनांमधील आवश्यकतेनुसार प्रायोगिक प्रक्रिया सेट करा.

c) मेल्टिंग वक्र: इन्स्ट्रुमेंट डीफॉल्ट प्रोग्राम सामान्यपणे वापरला जाऊ शकतो.

3. परिणाम विश्लेषण 

परिमाणवाचक प्रयोगांसाठी किमान तीन जैविक प्रतिकृती आवश्यक होत्या.प्रतिक्रिया नंतर, प्रवर्धन वक्र आणि वितळणे वक्र पुष्टी करणे आवश्यक आहे.

३.१ प्रवर्धन वक्र:

मानक प्रवर्धन वक्र एस-आकाराचे आहे.जेव्हा Ct मूल्य 20 आणि 30 च्या दरम्यान येते तेव्हा परिमाणात्मक विश्लेषण सर्वात अचूक असते. Ct मूल्य 10 पेक्षा कमी असल्यास, टेम्पलेट सौम्य करणे आणि पुन्हा चाचणी घेणे आवश्यक आहे.जेव्हा Ct मूल्य 30-35 च्या दरम्यान असते, तेव्हा टेम्प्लेट एकाग्रता किंवा प्रतिक्रिया प्रणालीची मात्रा वाढवणे आवश्यक आहे, ज्यामुळे प्रवर्धन कार्यक्षमता सुधारणे आणि परिणाम विश्लेषणाची अचूकता सुनिश्चित करणे.जेव्हा Ct मूल्य 35 पेक्षा जास्त असते, तेव्हा चाचणी परिणाम जनुकाच्या अभिव्यक्तीचे परिमाणात्मक विश्लेषण करू शकत नाहीत, परंतु गुणात्मक विश्लेषणासाठी वापरले जाऊ शकतात.

3.2 वितळणे वक्र:

वितळण्याच्या वक्रचे एकल शिखर सूचित करते की प्रतिक्रिया विशिष्टता चांगली आहे आणि परिमाणवाचक विश्लेषण केले जाऊ शकते;जर वितळण्याची वक्र दुहेरी किंवा अनेक शिखरे दर्शवत असेल, तर परिमाणात्मक विश्लेषण केले जाऊ शकत नाही.वितळण्याची वक्र दुहेरी शिखरे दर्शविते आणि लक्ष्य नसलेले शिखर हे प्राइमर डायमर आहे की डीएनए ॲग्रोज जेल इलेक्ट्रोफोरेसीसद्वारे विशिष्ट प्रवर्धन आहे हे ठरवणे आवश्यक आहे.प्राइमर डायमर असल्यास, प्राइमर एकाग्रता कमी करण्याची किंवा उच्च प्रवर्धन कार्यक्षमतेसह प्राइमर्सची पुनर्रचना करण्याची शिफारस केली जाते.जर ते विशिष्ट नसलेले प्रवर्धन असेल, तर कृपया ॲनिलिंग तापमान वाढवा किंवा विशिष्टतेसह प्राइमर्स पुन्हा डिझाइन करा.

नोट्स

तुमचे आरोग्य आणि सुरक्षितता सुनिश्चित करण्यासाठी कृपया आवश्यक PPE, जसे की लॅब कोट आणि हातमोजे घाला!

हे उत्पादन केवळ संशोधन वापरासाठी आहे！