2×सेन्सी डायरेक्ट प्रीमिक्स-यूएनजी (प्रोब क्यूपीसीआर)
मांजर क्रमांक: HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) हे DNA काढल्याशिवाय किंवा नमुना तयार न करता थेट नमुन्यांमधून पीसीआर करण्यासाठी डिझाइन केलेले आहे.या अभिकर्मकामध्ये हॉट-स्टार्ट डीएनए पॉलिमरेझ, युरेसिल डीएनए ग्लायकोसिलेस (यूएनजी), आरनेस इनहिबिटर, एमजीसीएल यांचा समावेश असतो.2, dNTPs (dTTP ऐवजी dUTP सह), आणि स्टॅबिलायझर्स, परिमाणात्मक PCR (qPCR) साठी.हे अभिकर्मक उच्च अवरोधक-सहिष्णुता प्रीफॉर्म करते, आणि अशा प्रकारे डीएनए काढल्याशिवाय घशातील स्वॅब, लाळ, अँटी-कॉग्युलेटेड संपूर्ण रक्त, प्लाझ्मा आणि सीरम यांसारखे नमुने शोधण्यासाठी ते थेट लागू केले जाऊ शकते.अभिकर्मक qPCR साठी प्रोप्रायटरी बफर वापरतो ज्यामध्ये अँटी-इनहिबिटरी DNA पॉलिमरेझ आणि UNG एन्झाइमच्या मिश्रित एन्झाईम असतात.म्हणून, ते अवरोधक असलेल्या नमुन्यांमधील लक्ष्य जनुकांचे चांगले प्रवर्धन मिळवू शकते आणि पीसीआर अवशिष्ट आणि एरोसोल प्रदूषणामुळे होणारे चुकीचे सकारात्मक प्रवर्धन रोखू शकते.हे अभिकर्मक बहुतेक फ्लोरोसेंट परिमाणात्मक पीसीआर साधनांशी सुसंगत आहे, जसे की अप्लाइड बायोसिस्टम्स, एपेनडॉर्फ, बायो-रॅड, रोचे आणि असेच.
घटक
1. 50×SensiDirect Enzyme/UNG मिक्स
2. 2×SensiDirect प्रीमिक्स बफर (dUTP)
स्टोरेज परिस्थिती
सर्व घटक दीर्घकालीन स्टोरेजसाठी -20℃ आणि 3 महिन्यांपर्यंत 4℃ ठेवावे.कृपया वितळल्यानंतर पूर्णपणे मिसळा आणि वापरण्यापूर्वी सेंट्रीफ्यूज करा.वारंवार फ्रीझ-थॉ टाळा.
सायकलिंग प्रोटोकॉल
| पाऊल | तापमान | वेळ | सायकल |
| पचन | 50℃ | 2 मि | 1 |
| पॉलिमरेझ सक्रियकरण | 95℃ | 1-5 मि | 1 |
| डेनचर | 95℃ | 10-20 | 40-50 |
| एनीलिंग/विस्तार | 56-64℃ | 20-60 चे दशक |
पाइपिंग सूचना
| अभिकर्मक | खंड प्रति प्रतिक्रिया | प्रति प्रतिक्रिया खंड | अंतिम एकाग्रता |
| 2×SensiDirect प्रीमिक्स बफर (dUTP) | 12.5µL | 25µL | 1× |
| 50×सेन्सीडायरेक्ट एन्झाइम/यूएनजी मिक्स | 0.5µL | 1µL | 1× |
| 25×प्राइमर-प्रोब मिक्स1, 2 | 1µL | 2µL | 1× |
| नमुना3, 4 | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| एकूण खंड | 25 μL | 50 μL | - |
1. प्राइमरची अंतिम एकाग्रता सामान्यतः 0.2μM असते.चांगल्या परिणामांसाठी, प्राइमर एकाग्रता 0.2-1μM च्या श्रेणीमध्ये ऑप्टिमाइझ केली जाऊ शकते.
2. साधारणपणे, प्रोब एकाग्रता 0.1-0.3μM च्या मर्यादेत ऑप्टिमाइझ केली जाऊ शकते.प्रोबची इष्टतम एकाग्रता रिअल टाइम पीसीआर ॲम्प्लीफिकेशन इन्स्ट्रुमेंट, प्रोबचा प्रकार आणि फ्लोरोसेंट लेबलिंग पदार्थाच्या प्रकाराशी संबंधित आहे.कृपया इन्स्ट्रुमेंट मॅन्युअल किंवा प्रत्येक फ्लोरोसेंट प्रोबच्या विशिष्ट आवश्यकतांचा संदर्भ घ्या.
3. वेगवेगळ्या प्रकारच्या नमुन्यांमध्ये विविध प्रकार आणि अवरोधकांची सामग्री आणि लक्ष्य जनुकाची कॉपी संख्या असते.नमुन्याचे प्रमाण वास्तविक स्थितीनुसार विचारात घेतले पाहिजे.आवश्यक असल्यास, न्यूक्लीज-मुक्त पाणी किंवा TE बफर घालून नमुना सौम्य करा.
4. वेगवेगळ्या नमुन्यांची शिफारस केलेली मात्रा:
| नमुना | एक 50 साठी खंड μL प्रतिक्रिया | कमाल प्रमाण |
| अँटीकॉग्युलेटेड संपूर्ण रक्त | 2.5 μL | 5% |
| प्लाझ्मा | 15 μL | ३०% |
| सिरम | 10 μL | 20% |
| घसा घासणे | 10 μL | 20% |
| लाळ | 10 μL | 20% |
गुणवत्ता नियंत्रण
1. फंक्शन डिटेक्शन: qPCR ची संवेदनशीलता, विशिष्टता आणि पुनरावृत्तीक्षमता.
2. एक्सोजेनस न्यूक्लीज क्रियाकलाप नाही: एक्सोजेनस एंडोन्यूक्लीज आणि एक्सोन्यूक्लीज प्रदूषण नाही.
उत्पादनाच्या नोट्स
1. हे उत्पादन नवीन प्रकारचे हॉट-स्टार्ट DNA पॉलिमरेज वापरते, जे 1-5 मिनिटांत सक्रिय केले जाऊ शकते. त्याचे प्रतिक्रिया बफर ऑप्टिमाइझ केले गेले असल्याने, ते प्रोब पद्धत वापरून दुहेरी किंवा एकाधिक फ्लूरोसेन्स परिमाणात्मक पीसीआरसाठी अधिक योग्य आहे.
2. PCR प्रवर्धनाचे Rn मूल्य खूप कमी असल्यास किंवा प्रवर्धन स्पष्टपणे प्रतिबंधित असल्यास, नमुन्याचे प्रमाण कमी करणे, प्रतिक्रियेचे प्रमाण वाढवणे किंवा नमुन्याचे पूर्वीचे सौम्य करणे यामुळे परिणाम सुधारू शकतात.
3. रक्त, लाळ, लघवी, घशातील स्वॅब इत्यादींचे संकलन क्लिनिकल निकषांच्या आवश्यकतांचे पालन केले पाहिजे आणि न्यूक्लिक ॲसिडचा ऱ्हास टाळण्यासाठी ताजे नमुना वापरला जाऊ शकतो.
4. भिन्न ॲम्प्लिकॉन्सची dUTP ची भिन्न उपयोग कार्यक्षमता आणि UNG ला संवेदनशीलता असल्याने, UNG प्रणाली वापरताना शोध संवेदनशीलता कमी झाल्यास अभिकर्मक ऑप्टिमाइझ केले जावे.कृपया आवश्यक असल्यास तांत्रिक समर्थनासाठी आमच्याशी संपर्क साधा.
5. कॅरीओव्हर पीसीआर उत्पादनांचे एक-चरण प्रतिक्रियांमधील प्रवर्धन टाळण्यासाठी, प्रवर्धनासाठी समर्पित प्रायोगिक क्षेत्र आणि विंदुक आवश्यक आहे.हातमोजे वापरून चालवा आणि वारंवार बदला आणि पीसीआर प्रवर्धनानंतर प्रतिक्रिया ट्यूब उघडू नका.
