Rnase इनहिबिटर
म्युरिन आरनेज इनहिबिटर हा रिकॉम्बिनंट म्युरिन आरनेस इनहिबिटर आहे जो E.coli मधून व्यक्त आणि शुद्ध केला जातो.हे RNase A, B किंवा C ला 1:1 च्या प्रमाणात नॉन-कॉव्हॅलेंट बाँडिंगद्वारे बांधले जाते, ज्यामुळे तीन एन्झाईम्सची क्रिया रोखते आणि RNA चे ऱ्हास होण्यापासून संरक्षण होते.तथापि, हे Aspergillus पासून RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H किंवा RNase विरुद्ध प्रभावी नाही.Murine RNase इनहिबिटरची RT-PCR, RT-qPCR आणि IVT mRNA द्वारे चाचणी केली गेली आणि विविध व्यावसायिक रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेस, DNA पॉलिमरेसेस आणि RNA पॉलिमरेसेसशी सुसंगत होती.
मानवी RNase इनहिबिटरच्या तुलनेत, म्युरिन RNase इनहिबिटरमध्ये दोन सिस्टीन नसतात जे ऑक्सिडेशनसाठी अत्यंत संवेदनशील असतात ज्यामुळे इनहिबिटर निष्क्रिय होतात.जे डीटीटीच्या कमी सांद्रतेवर (1 मिमी पेक्षा कमी) स्थिर करते.हे वैशिष्ट्य ते प्रतिक्रियांमध्ये वापरण्यासाठी योग्य बनवते जेथे डीटीटीची उच्च सांद्रता प्रतिक्रियेला प्रतिकूल आहे (उदा. रिअल-टाइम RT-PCR).
Aअर्ज
हे उत्पादन कोणत्याही प्रयोगात मोठ्या प्रमाणावर वापरले जाऊ शकते जेथे RNA ऱ्हास टाळण्यासाठी RNase हस्तक्षेप शक्य आहे, जसे की:
1.cDNA, RT-PCR, RT-qPCR, इ.च्या पहिल्या स्ट्रँडचे संश्लेषण.
2.इन विट्रो ट्रान्सक्रिप्शन/ ट्रान्सलेशन (उदा., इन विट्रो व्हायरल प्रतिकृती प्रणाली) दरम्यान आरएनएचे ऱ्हास होण्यापासून संरक्षण करते.
3.आरएनए पृथक्करण आणि शुद्धीकरण दरम्यान RNase क्रियाकलाप प्रतिबंध.
स्टोरेज अटी
उत्पादन -25～-15 ℃ वर साठवले जाऊ शकते, 2 वर्षांसाठी वैध आहे.
स्टोरेज बफर
50 mM KCl, 20 mM HEPES-KOH (pH 7.6, 25 ℃), 8 mM DTT आणि 50% ग्लिसरॉल.
युनिट व्याख्या
5ng ribonuclease A ची क्रिया 50% ने रोखण्यासाठी आवश्यक असलेल्या म्युरिन RNase इनहिबिटरचे प्रमाण एक युनिट (U) म्हणून परिभाषित केले गेले.
प्रथिनांचे आण्विक वजन
म्युरिन RNase इनहिबिटरचे आण्विक वजन 50 kDa आहे.
गुणवत्ता नियंत्रण
Exonuclease क्रियाकलाप:
1 μg λ -Hind III डायजेस्ट DNA 37℃ वर 16 तासांसाठी 40 U च्या म्युरिन RNase इनहिबिटरने ॲग्रोज जेल इलेक्ट्रोफोरेसीसने निर्धारित केल्याप्रमाणे कोणतेही ऱ्हास होत नाही.
एंडोन्यूक्लीज क्रियाकलाप:
1μg λ DNA सह 40 U च्या म्युरिन RNase इनहिबिटरने 16 तासांसाठी 37℃ वर घेतल्यास ॲगरोज जेल इलेक्ट्रोफोरेसीस द्वारे निर्धारित केल्याप्रमाणे कोणतेही ऱ्हास होत नाही.
निकिंग क्रियाकलाप:
1μg pBR322 सह 40U म्युरिन RNase इनहिबिटर 37℃ वर 16 तासांसाठी वापरल्यास ॲग्रोज जेल इलेक्ट्रोफोरेसीस द्वारे निर्धारित केल्यानुसार कोणतेही ऱ्हास होत नाही.
RNase क्रियाकलाप:
40U च्या म्युरिन RNase इनहिबिटरसह 1.6μg MS2 RNA सह 4h साठी 37℃ वर ॲगरोज जेल इलेक्ट्रोफोरेसीसने निर्धारित केल्याप्रमाणे कोणतेही ऱ्हास होत नाही.
E.कोलाय डीएनए:
E. coli 16S rRNA लोकससाठी विशिष्ट प्राइमर्ससह TaqMan qPCR वापरून E. coli genomic DNA च्या उपस्थितीसाठी 40 U म्युरिन RNase इनहिबिटरची तपासणी केली जाते.ई. कोलाई जीनोमिक डीएनए दूषितता ≤ ०.१ pg/40 U आहे.
Notes
1.हिंसक दोलन किंवा ढवळणे एंजाइम निष्क्रियतेकडे नेईल.
2. या अवरोधकची इष्टतम तापमान श्रेणी 25-55 ℃ होती आणि ती 65 ℃ आणि त्याहून अधिक तापमानात निष्क्रिय होती.
3. RNase H, RNase 1 आणि RNase T1 च्या क्रियाकलापांना मुरिन RNase इनहिबिटरने प्रतिबंधित केले नाही.
4. RNase क्रियाकलापाचा प्रतिबंध पीएचच्या विस्तृत श्रेणीमध्ये आढळून आला (pH 5-9 सर्व सक्रिय होते), आणि सर्वोच्च क्रियाकलाप pH 7-8 वर दिसून आला.
5.रिबोन्यूक्लीज सामान्यत: विकृत स्थितीत क्रियाकलाप टिकवून ठेवत असल्याने, RNase इनहिबिटर रेणूंचे विकृतीकरण टाळण्यासाठी काळजी घेणे आवश्यक आहे जे रिबोन्यूक्लीजसह जटिल आहेत.सक्रिय रिबोन्यूक्लिझचे प्रकाशन रोखण्यासाठी, 50 डिग्री सेल्सिअसपेक्षा जास्त तापमान आणि युरिया किंवा इतर कमी करणारे एजंट्सचे उच्च प्रमाण टाळले पाहिजे.
