वाइल्ड टाक डीएनए पॉलिमरेझ
Taq DNA पॉलिमरेझ हे थर्मस ॲक्वाटिकस YT-1 चे थर्मोस्टेबल DNA पॉलिमरेझ आहे, ज्यामध्ये 5′→3′ पॉलिमरेझ क्रियाकलाप आणि 5′ फ्लॅप एंडोन्यूक्लिझ क्रियाकलाप आहे.
घटक
| घटक | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10× Taq बफर | 2×1 मिली | 2×10 मिली | 2×50 मिली | ५×२०० मिली |
| Taq DNA पॉलिमरेज (5 U/μL) | 0.1 मिली | 1 मिली | 5 मिली | 5×10 मिली |
स्टोरेज स्थिती
वाहतूक 0°C च्या खाली आणि -25°C~-15°C वर साठवली जावी.
युनिट व्याख्या
75 डिग्री सेल्सिअस तापमानात 30 मिनिटांत 15 एनएमओएल डीएनटीपी ऍसिडमध्ये अघुलनशील पदार्थामध्ये समाविष्ट करणाऱ्या एन्झाइमचे प्रमाण म्हणून एक युनिट परिभाषित केले जाते.
गुणवत्ता नियंत्रण
1.प्रथिने शुद्धता परख (SDS-PAGE):Taq DNA पॉलिमरेजची शुद्धता ≥95% SDS-PAGE विश्लेषणाद्वारे निर्धारित केली गेली.
2.Endonuclease क्रियाकलाप:1 μg λDNA सह Taq DNA पॉलिमरेझचे किमान 5 U 37 ℃ वर 16 तासांसाठी निर्धारित केल्यानुसार कोणतेही शोधण्यायोग्य ऱ्हास होत नाही.
3.Exonuclease क्रियाकलाप:1 μg λ -हिंद Ⅲ डायजेस्ट डीएनए 16 तास 37 ℃ तापमानासह कमीत कमी 5 U Taq DNA पॉलिमरेझ केल्याने निर्धारित केल्याप्रमाणे कोणतेही ऱ्हास होत नाही.
4.Nickase क्रियाकलाप:1 μg pBR322 DNA सह किमान 5 U Taq DNA पॉलिमरेझ 37°C तापमानात 16 तासांसाठी निर्धारित केल्याप्रमाणे कोणतेही शोधण्यायोग्य ऱ्हास होत नाही.
5.RNase क्रियाकलाप:1.6 μg MS2 RNA सह किमान 5 U Taq DNA पॉलिमरेझ 37°C तापमानात 16 तासांसाठी निर्धारित केल्याप्रमाणे कोणतेही शोधण्यायोग्य ऱ्हास होत नाही.
6.ई कोलाय्DNA:E. coli 16S rRNA लोकससाठी विशिष्ट प्राइमर्ससह TaqMan qPCR वापरून E. coli genomic DNA च्या उपस्थितीसाठी Taq DNA पॉलिमरेझचे 5 U तपासले जाते.ई. कोलाई जीनोमिक डीएनए दूषितता ≤1 कॉपी आहे.
7.पीसीआर प्रवर्धन (५.० केबी लॅम्बडा डीएनए)- PCR प्रवर्धनाच्या 25 चक्रांसाठी Taq DNA पॉलिमरेझच्या 5 युनिटसह 5 ng Lambda DNA असलेली 50 μL प्रतिक्रिया अपेक्षित 5.0 kb उत्पादनात परिणाम करते.
प्रतिक्रिया सेटअप
| घटक | खंड |
| टेम्पलेट डीएनएa | पर्यायी |
| 10 μM फॉरवर्ड प्राइमर | 1 μL |
| 10 μM रिव्हर्स प्राइमर | 1 μL |
| dNTP मिक्स (प्रत्येकी 10 मिमी) | 1 μL |
| 10×Taq बफर | 5 μL |
| Taq DNA पॉलिमरेझb | 0.25 μL |
| न्यूक्लीज मुक्त पाणी | 50 μL पर्यंत |
टिपा:
1) वेगवेगळ्या टेम्पलेट्सची इष्टतम प्रतिक्रिया एकाग्रता भिन्न आहे.खालील तक्ता 50 μL प्रतिक्रिया प्रणालीचा शिफारस केलेला टेम्पलेट वापर दर्शविते.
| डीएनए | रक्कम |
| जीनोमिक | 1 एनजी -1 μg |
| प्लाझमिड किंवा व्हायरल | 1 pg-1 एनजी |
2) Taq DNA पॉलिमरेझची इष्टतम एकाग्रता 0.25 µL ~ 1 µL विशेषीकृत अनुप्रयोगांमध्ये असू शकते.
प्रतिक्रियाकार्यक्रम
| पाऊल | तापमान(°C) | वेळ | सायकल |
| प्रारंभिक विकृतीकरणa | 95 ℃ | ५ मिनिटे | - |
| विकृतीकरण | 95 ℃ | 15-30 से | 30-35 सायकल |
| एनीलिंगb | 60 ℃ | १५ से | |
| विस्तार | 72 ℃ | 1kb/मिनिट | |
| अंतिम विस्तार | 72 ℃ | ५ मिनिटे | - |
टिपा:
1) प्रारंभिक विकृतीकरण स्थिती बहुतेक प्रवर्धन प्रतिक्रियांसाठी योग्य आहे आणि टेम्पलेट संरचनेच्या जटिलतेनुसार सुधारित केली जाऊ शकते.जर टेम्प्लेटची रचना जटिल असेल, तर प्रारंभिक विकृतीकरण प्रभाव सुधारण्यासाठी प्री-डिनेच्युरेशन वेळ 5 - 10 मिनिटांपर्यंत वाढवता येईल.
2) प्राइमरच्या Tm मूल्यानुसार ॲनिलिंग तापमान समायोजित करणे आवश्यक आहे, जे सामान्यतः प्राइमरच्या Tm मूल्यापेक्षा 3~5 ℃ कमी असते;जटिल टेम्पलेट्ससाठी, कार्यक्षम प्रवर्धन प्राप्त करण्यासाठी ॲनिलिंग तापमान समायोजित करणे आणि विस्तार वेळ वाढवणे आवश्यक आहे.
